| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1. 基因编辑技术研究概述 | 第12-15页 |
| 1.1 基因编辑新技术 | 第12-14页 |
| 1.2 基因编辑技术的用途及展望 | 第14-15页 |
| 1.3 基因编辑技术研究的争议 | 第15页 |
| 2. CRISPR/Cas9的研究历程 | 第15-19页 |
| 2.1 CRISPR系统的基本结构与分类 | 第15-16页 |
| 2.2 CRISPR系统的作用机理 | 第16-17页 |
| 2.3 三种编辑新技术的比较 | 第17页 |
| 2.4 CRISPR/Cas9脱靶效应 | 第17-18页 |
| 2.5 CRISPR系统的应用 | 第18-19页 |
| 3. MSTN基因研究概述 | 第19-23页 |
| 3.1 MSTN基因的发现与结构 | 第19-20页 |
| 3.2 山羊MSTN基因的结构特点 | 第20页 |
| 3.3 MSTN基因的调控机制 | 第20页 |
| 3.4 在各个动物方面的研究进展 | 第20-22页 |
| 3.5 MSTN基因的研究意义 | 第22-23页 |
| 第二章 CRISPR/Cas9质粒构建与鉴定 | 第23-36页 |
| 1. 实验材料 | 第23-25页 |
| 1.1 实验试剂与材料 | 第23页 |
| 1.2 实验仪器 | 第23-24页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第24-25页 |
| 1.4 所用软件 | 第25页 |
| 2. 实验方法 | 第25-33页 |
| 2.1 MSTN基因的查阅及检索 | 第25页 |
| 2.2 MSTN基因敲除位点的选择和sgRNA的设计 | 第25页 |
| 2.3 CRISPR/Cas9二合一质粒构建及鉴定 | 第25-29页 |
| 2.4 体外转录 | 第29-33页 |
| 3. 结果 | 第33-36页 |
| 3.1 MSTN基因敲除位点设计 | 第33-34页 |
| 3.2 CRISPR/Cas9二合一质粒构建及鉴定 | 第34-35页 |
| 3.3 CRISPR/Cas9二合一质粒体外转录 | 第35-36页 |
| 第三章 MSTN基因突变山羊的制备 | 第36-54页 |
| 1. 实验材料 | 第36-38页 |
| 1.1 实验动物 | 第36页 |
| 1.2 主要仪器 | 第36页 |
| 1.3 主要实验器材 | 第36-37页 |
| 1.4 主要试剂及药品 | 第37页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第37-38页 |
| 2. 方法 | 第38-41页 |
| 2.1 供体羊超数排卵与供受体同期发情 | 第38页 |
| 2.2 供体山羊受精卵的回收 | 第38-39页 |
| 2.3 胚胎显微注射mRNA | 第39-40页 |
| 2.4 胚胎移植 | 第40-41页 |
| 2.5 术后护理与观察 | 第41页 |
| 3. MSTN基因突变检测 | 第41-43页 |
| 3.1 山羊基因组的提取 | 第41页 |
| 3.2 PCR检测与测序 | 第41-42页 |
| 3.3 MSTN基因PCR扩增产物TA克隆 | 第42-43页 |
| 4. 脱靶预测及检测 | 第43-44页 |
| 5. MSTN基因突变山羊生产性能分析 | 第44-45页 |
| 5.1 称量 | 第44页 |
| 5.2 石蜡切片的制作 | 第44-45页 |
| 6. 结果 | 第45-54页 |
| 6.1 超数排卵及受体山羊妊娠分娩情况 | 第45页 |
| 6.2 胎儿MSTN基因突变检测情况 | 第45-49页 |
| 6.3 off-target检测结果 | 第49-50页 |
| 6.4 MSTN基因突变山羊生产性能分析 | 第50-54页 |
| 讨论 | 第54-56页 |
| 全文总结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
