| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩写词及英汉对照 | 第7-12页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 烟草病毒病概述 | 第12-15页 |
| 1.2 烟草3种主要病毒的生物学及分子生物学特性 | 第15-19页 |
| 1.2.1 烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus, TMV） | 第15-16页 |
| 1.2.2 黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus, CMV） | 第16-18页 |
| 1.2.3 马铃薯Y病毒（Potato virus Y, PVY） | 第18-19页 |
| 1.3 酶联免疫吸附测定（Enzyme- linked immunosorbent assay, ELISA） | 第19页 |
| 1.4 实时荧光定量PCR技术 | 第19-20页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21-22页 |
| 2.1.2 土壤样品 | 第22-23页 |
| 2.1.3 病毒来源 | 第23页 |
| 2.1.4 菌株及抗血清 | 第23页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.6 主要试剂的配制 | 第23-25页 |
| 2.1.7 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.8 数据分析 | 第26页 |
| 2.2 方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 RNA提取用具的处理 | 第26页 |
| 2.2.2 感染病毒的烟草叶片总RNA的抽提 | 第26-27页 |
| 2.2.3 感染病毒烟田土壤总RNA的抽提 | 第27-28页 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR标准曲线的制作 | 第28-31页 |
| 2.2.4.1 引物的设计与合成 | 第28-29页 |
| 2.2.4.2 病毒TMV、CMV、PVY质粒DNA标准品的制备 | 第29-31页 |
| 2.2.5 病毒TMV、CMV及PVY的实时荧光定量 | 第31-32页 |
| 2.2.6 种子浸泡、浸根及育苗基质带毒的处理方法 | 第32-33页 |
| 2.2.6.1 种子浸泡处理方法 | 第32页 |
| 2.2.6.2 烟苗浸根处理方法 | 第32-33页 |
| 2.2.6.3 育苗基质带毒处理方法 | 第33页 |
| 2.2.7 不同方法处理后烟苗中三种病毒的检测 | 第33-34页 |
| 2.2.7.1 间接ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测 | 第33-34页 |
| 2.2.7.2 RT-PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）检测 | 第34页 |
| 2.2.7.3 RT-qPCR（Reverse Transcription Quantitation-Polymerase Chain Reaction）检测 | 第34页 |
| 2.2.8 实时荧光定量 PCR 对田间土壤样品的检测 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-64页 |
| 3.1 烟草叶片总RNA的抽提 | 第35页 |
| 3.2 烟草接种叶片（接种体）中TMV、CMV和PVY含量的检测 | 第35-41页 |
| 3.2.1 病毒TMV、CMV和PVY标准曲线标准品（质粒DNA）的制备 | 第35-36页 |
| 3.2.2 实时荧光定量PCR引物设计与筛选 | 第36-37页 |
| 3.2.3 实时荧光定量PCR体系的建立 | 第37-38页 |
| 3.2.4 实时荧光定量PCR测定烟草叶片中TMV含量 | 第38-39页 |
| 3.2.5 实时荧光定量PCR测定烟草叶片中CMV含量 | 第39-40页 |
| 3.2.6 实时荧光定量PCR测定烟草叶片中PVY含量 | 第40-41页 |
| 3.3 种子浸泡、浸根和育苗基质处理后三种病毒对烟苗的侵染 | 第41-58页 |
| 3.3.1 各浓度病毒汁液中三种病毒的具体含量 | 第41-42页 |
| 3.3.2 种子浸泡处理后三种病毒对烟苗的侵染 | 第42-48页 |
| 3.3.2.1 种子浸泡 24h后育苗三种病毒的ELISA检测 | 第42-43页 |
| 3.3.2.2 种子浸泡 24h后育苗三种病毒的RT-PCR检测 | 第43-45页 |
| 3.3.2.3 种子浸泡 24h后育苗苗期烟苗的发病情况 | 第45-46页 |
| 3.3.2.4 种子浸泡 24h后放置3个月育苗三种病毒的ELISA检测 | 第46-47页 |
| 3.3.2.5 种子浸泡 24h后放置5个月育苗三种病毒的ELISA检测 | 第47-48页 |
| 3.3.3 浸根处理后三种病毒对烟苗的侵染 | 第48-52页 |
| 3.3.3.1 浸根处理 2 h后烟苗中三种病毒的ELISA检测 | 第48-49页 |
| 3.3.3.2 浸根处理 2 h后烟苗中三种病毒RT-PCR检测 | 第49-51页 |
| 3.3.3.3 浸根处理 2h后苗期烟苗的发病情况 | 第51-52页 |
| 3.3.4 育苗基质处理后育苗三种病毒对烟苗的侵染 | 第52-58页 |
| 3.3.4.1 育苗基质处理 1d后育苗三种病毒的ELISA检测 | 第52-53页 |
| 3.3.4.2 育苗基质处理 1d后育苗三种病毒的RT-PCR检测 | 第53-55页 |
| 3.3.4.3 育苗基质处理 1d后育苗苗期烟苗的发病情况 | 第55-56页 |
| 3.3.4.4 育苗基质处理后放置3个月育苗三种病毒的ELISA检测 | 第56-57页 |
| 3.3.4.5 育苗基质处理后放置5个月育苗三种病毒的ELISA检测 | 第57-58页 |
| 3.4 毒源烟株收种子放置1个月后育苗三种病毒对烟苗的侵染 | 第58-59页 |
| 3.5 大田土壤中三种病毒对烟苗的侵染及病毒的定量 | 第59-64页 |
| 3.5.1 大田采集土样育苗三种病毒对烟苗的侵染 | 第59-62页 |
| 3.5.2 大田采集土样中三种病毒的定量测定 | 第62-64页 |
| 4 结论与讨论 | 第64-71页 |
| 4.1 结论 | 第64页 |
| 4.2 讨论 | 第64-71页 |
| 4.2.1 烟草叶片TMV、CMV和PVY含量的分析 | 第64-66页 |
| 4.2.2 三种病毒对烟苗的侵染分析 | 第66-69页 |
| 4.2.2.1 种子携带三种病毒对烟苗的侵染分析 | 第66-67页 |
| 4.2.2.2 浸根处理三种病毒对烟苗的侵染分析 | 第67页 |
| 4.2.2.3 育苗基质/土壤带毒对烟苗的侵染分析 | 第67-69页 |
| 4.2.3 土壤中三种病毒的分子检测 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 附录A | 第79-82页 |
| 附录B | 第82页 |
