| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 第一章 综述 | 第15-43页 |
| 第一节 对虾抗病毒病感染功能分子的研究进展 | 第15-29页 |
| 1 Toll 受体 | 第16-19页 |
| 2 C-型凝集素 | 第19-21页 |
| 3 抗脂多糖因子 | 第21-22页 |
| 4 酚氧化酶原活化系统 | 第22-24页 |
| 5 其他相关分子 | 第24-26页 |
| 6 总结与展望 | 第26-29页 |
| 第二节 Fortilin 蛋白研究进展 | 第29-35页 |
| 1 Fortilin 的结构特性 | 第29-31页 |
| 2 Fortilin 的生物活性 | 第31-33页 |
| ·分子间相互作用 | 第31页 |
| ·细胞内重要性 | 第31-32页 |
| ·细胞外活性 | 第32-33页 |
| 3 对虾中Fortilin 的研究概况 | 第33-35页 |
| 第三节 穿膜肽TAT 及其应用研究进展 | 第35-43页 |
| 1 TAT 的结构 | 第36页 |
| 2 TAT 的穿膜机制 | 第36-38页 |
| 3 TAT 应用 | 第38-43页 |
| 第二章 Fortilin 和 TAT 融合蛋白在毕赤酵母的表达 | 第43-87页 |
| 第一节 融合基因的克隆 | 第43-59页 |
| 1 材料和方法 | 第43-54页 |
| ·材料 | 第43-45页 |
| ·实验方法 | 第45-54页 |
| 2 实验结果 | 第54-58页 |
| ·凡纳滨对虾Fortilin 基因的扩增 | 第54-56页 |
| ·GFP 基因的扩增 | 第56页 |
| ·融合基因的获得 | 第56-57页 |
| ·TAT-Fortilin 和Fortilin-TAT 基因的获得 | 第57-58页 |
| 3 小结 | 第58-59页 |
| 第二节 融合基因的亚克隆 | 第59-66页 |
| 1 材料和方法 | 第59-64页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-64页 |
| 2 实验结果 | 第64-65页 |
| ·重组质粒PCR 鉴定 | 第64-65页 |
| ·重组质粒的NDA 序列测定 | 第65页 |
| 3 小结 | 第65-66页 |
| 第三节 融合基因在毕赤酵母的分泌表达 | 第66-87页 |
| 1 材料和方法 | 第66-78页 |
| ·材料 | 第66-70页 |
| ·实验方法 | 第70-78页 |
| 2 实验结果 | 第78-82页 |
| ·重组质粒的大量提取 | 第78-79页 |
| ·重组毕赤酵母的PCR 鉴定 | 第79-80页 |
| ·重组酵母发酵上清的SDS-PAGE 检测 | 第80-81页 |
| ·重组表达蛋白的质谱检测 | 第81-82页 |
| 3 小结 | 第82页 |
| 4 分析与讨论 | 第82-87页 |
| ·重叠延伸PCR | 第82-83页 |
| ·高保真聚合酶的使用 | 第83-84页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第84-86页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第86-87页 |
| 第三章 重组蛋白体外活性研究 | 第87-111页 |
| 第一节 重组融合蛋白体外穿膜递送研究 | 第87-95页 |
| 1 材料和方法 | 第87-90页 |
| ·材料 | 第87-88页 |
| ·实验方法 | 第88-90页 |
| 2 实验结果 | 第90-92页 |
| ·凡纳滨对虾血细胞原代培养 | 第90-91页 |
| ·融合蛋白体外培养血细胞穿膜效果 | 第91页 |
| ·融合蛋白离体肠道穿膜观察 | 第91-92页 |
| 3 小结 | 第92-95页 |
| 第二节 重组融合蛋白体外免疫活性研究 | 第95-111页 |
| 1 材料和方法 | 第95-101页 |
| ·材料 | 第95-97页 |
| ·实验方法 | 第97-101页 |
| 2 实验结果 | 第101-104页 |
| ·对虾白斑病毒的制备 | 第101-102页 |
| ·WSSV 病毒体外感染浓度确定 | 第102-103页 |
| ·重组蛋白对血细胞免疫酶活的影响 | 第103-104页 |
| 3 分析与讨论 | 第104-111页 |
| ·凡纳滨对虾血细胞原代培养 | 第104-106页 |
| ·TAT 引导的Fortilin 体外穿膜作用 | 第106-107页 |
| ·重组蛋白的免疫活性 | 第107-111页 |
| 第四章 饲料中添加重组蛋白对凡纳滨对虾免疫的影响 | 第111-122页 |
| 1 材料与方法 | 第111-114页 |
| ·重组蛋白冻干粉的制备 | 第111页 |
| ·实验饲料的制作 | 第111页 |
| ·实验动物 | 第111页 |
| ·饲养管理 | 第111-112页 |
| ·对虾样品的采集、分析 | 第112-113页 |
| ·攻毒实验 | 第113页 |
| ·统计分析 | 第113-114页 |
| 2 实验结果 | 第114-116页 |
| ·血细胞计数 | 第114页 |
| ·呼吸爆发活性 | 第114页 |
| ·酚氧化酶活性 | 第114-115页 |
| ·超氧化物歧化酶活性 | 第115页 |
| ·一氧化氮合酶活性 | 第115页 |
| ·攻毒结果 | 第115-116页 |
| 3 分析与讨论 | 第116-122页 |
| 参考文献 | 第122-136页 |
| 致谢 | 第136-138页 |
| 附录 | 第138-154页 |