| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| 1.1 重金属铅对生物体的影响 | 第13-14页 |
| 1.2 铅对血红素的影响 | 第14页 |
| 1.3 血红素的生物合成和降解 | 第14-15页 |
| 1.3.1 血红素合成 | 第14-15页 |
| 1.3.2 血红素降解 | 第15页 |
| 1.4 血红素的生理学功能 | 第15-16页 |
| 1.5 血红素调控路径 | 第16-20页 |
| 1.5.1 CNC家族 | 第16-17页 |
| 1.5.2 血红素-Bach/Nrf-Maf路径 | 第17-18页 |
| 1.5.3 Bach/Nrf-Maf路径组分简介 | 第18-20页 |
| 1.5.4 全基因组倍增 | 第20页 |
| 1.6 血红素、Bach/Nrf-Maf路径和胰蛋白酶原基因 | 第20-21页 |
| 1.7 模式生物斑马鱼 | 第21页 |
| 1.8 本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 实验材料与方法 | 第22-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.1 斑马鱼的来源和饲养 | 第22页 |
| 2.1.2 ZF4细胞的来源和培养 | 第22页 |
| 2.2 工具酶、载体和试剂盒 | 第22页 |
| 2.3 主要的生化试剂 | 第22-23页 |
| 2.4 主要实验药品的配制 | 第23页 |
| 2.5 引物列表 | 第23-25页 |
| 2.6 主要仪器设备 | 第25页 |
| 2.7 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.7.1 实验材料的获得 | 第25-27页 |
| 2.7.2 斑马鱼总RNA与ZF4细胞RNA样品的获取 | 第27-28页 |
| 2.7.3 目的基因扩增 | 第28-30页 |
| 2.7.4 目的DNA片段回收 | 第30页 |
| 2.7.5 目的DNA片段连接到载体上 | 第30页 |
| 2.7.6 连接产物转化大肠杆菌DH5 α感受态细胞以及阳性检测 | 第30-31页 |
| 2.7.7 斑马鱼胚胎整体原位杂交 | 第31-32页 |
| 2.7.8 σ-dianisidine(邻联茴香胺)染色 | 第32-33页 |
| 2.7.9 RT-PCR | 第33页 |
| 2.7.10 Real-time RCR | 第33页 |
| 2.7.11 MTT法检测细胞存活率 | 第33-35页 |
| 3 实验结果和分析 | 第35-61页 |
| 3.1 斑马鱼bach基因的克隆与同源性分析 | 第35-39页 |
| 3.1.1 斑马鱼bach基因的克隆 | 第35-36页 |
| 3.1.2 斑马鱼Bach蛋白同源性分析 | 第36-37页 |
| 3.1.3 斑马鱼Bach蛋白系统发育进化分析 | 第37-39页 |
| 3.2 斑马鱼bach基因时空表达研究 | 第39-42页 |
| 3.2.1 RT-PCR研究斑马鱼bach基因发育各时期的表达情况 | 第39-40页 |
| 3.2.2 胚胎整体原位杂交技术研究斑马鱼bach基因的时空表达情况 | 第40-42页 |
| 3.3 bach基因对铅毒性的应答差异 | 第42-43页 |
| 3.4 斑马鱼nrf1a和nrf2b基因的时空表达情况 | 第43-45页 |
| 3.4.1 探针的合成 | 第43页 |
| 3.4.2 胚胎整体原位杂交 | 第43-45页 |
| 3.5 铅抑制胰蛋白酶原基因表达的分子路径 | 第45-48页 |
| 3.5.1 胚胎整体原位杂交检测不同浓度铅处理对胰蛋白酶原基因表达的影响 | 第45-47页 |
| 3.5.2 Real-time PCR检测不同浓度铅处理对胰蛋白酶原基因表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.6 铅对血红素生物合成与降解的影响 | 第48-50页 |
| 3.6.1 血红素染色实验 | 第48页 |
| 3.6.2 铅处理对血红素合成酶基因的影响 | 第48-50页 |
| 3.6.3 铅处理对血红素降解相关基因的影响 | 第50页 |
| 3.7 血红素调节胰蛋白酶原基因表达的分子路径初探 | 第50-51页 |
| 3.8 铅是否通过Bach/Nrf调控途径抑制胰蛋白酶原基因的表达 | 第51-61页 |
| 3.8.1 铅处理斑马鱼胚胎对Bach/Nrf-Maf调控途径相关基因的影响 | 第51-57页 |
| 3.8.2 羟基酪醇对斑马鱼ZF4细胞胰蛋白酶原基因的影响 | 第57-61页 |
| 4 讨论与展望 | 第61-66页 |
| 4.1 斑马鱼bach基因的克隆、序列比对及系统发育树分析 | 第61页 |
| 4.2 bach基因表达模式研究 | 第61-62页 |
| 4.3 铅抑制胰蛋白酶原基因表达的分子路径 | 第62-64页 |
| 4.3.1 铅通过调控血红素生物合成酶的转录来抑制血红素合成 | 第62-63页 |
| 4.3.2 血红素调节的Bach/Nrf-Maf路径调节胰蛋白酶原基因表达 | 第63-64页 |
| 4.3.3 铅直接通过Bach/Nrf-Maf路径调节胰蛋白酶原基因表达 | 第64页 |
| 4.4 展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 研究生期间学术论文已发表及待发表情况 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
