主要英文缩略词索引 | 第4-5页 |
摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
第1章 前言 | 第13-15页 |
第2章 实验材料 | 第15-19页 |
2.1 实验标本 | 第15页 |
2.2 实验试剂 | 第15-16页 |
2.3 主要实验仪器 | 第16-19页 |
第3章 实验方法 | 第19-29页 |
3.1 原代培养HPASMCs | 第19-20页 |
3.1.1 组织取材 | 第19页 |
3.1.2 细胞培养 | 第19-20页 |
3.2 人肺动脉平滑肌细胞的染色、鉴定 | 第20页 |
3.3 实验分组 | 第20-21页 |
3.4 ROCK-1 si RNA及Survivin siRNA的序列设计和细胞转染 | 第21页 |
3.5 realtime-PCR | 第21-23页 |
3.5.1 细胞RNA的提取 | 第21-22页 |
3.5.2 紫外吸收法测定RNA的浓度及纯度 | 第22页 |
3.5.3 cDNA合成 | 第22页 |
3.5.4 realtime-PCR方法检测HPASMCs中ROCK-1、Survivin的mRNA表达水平 | 第22-23页 |
3.6 用Western-blot方法检测HPASMCs中ROCK-1、Survivin、β-actin蛋白的表达量 | 第23-26页 |
3.6.1 细胞总蛋白的提取 | 第23-24页 |
3.6.2 应用BCA法测定蛋白浓度 | 第24页 |
3.6.3 蛋白电泳 | 第24-25页 |
3.6.4 转膜 | 第25页 |
3.6.5 免疫反应 | 第25-26页 |
3.6.6 化学发光 | 第26页 |
3.6.7 胶片图像分析 | 第26页 |
3.7 细胞增殖检测(CCK8检测) | 第26-27页 |
3.8 免疫荧光 | 第27-29页 |
3.8.1 细胞免疫荧光 | 第27页 |
3.8.2 EDU免疫荧光 | 第27-29页 |
第4章 统计学分析 | 第29-31页 |
第5章 实验结果 | 第31-45页 |
5.1 HPASMCs的鉴定 | 第31-32页 |
5.2 常氧及低氧状态下,HPASMCs中ROCK-1 表达情况 | 第32-37页 |
5.2.1 realtime-PCR检测HPASMCs中ROCK-1 mRNA的表达 | 第32-33页 |
5.2.2 Western blot检测HPASMCs中ROCK-1 蛋白表达 | 第33-34页 |
5.2.3 CCK8检测细胞增殖能力 | 第34-35页 |
5.2.4 免疫荧光检测细胞ROCK-1 蛋白的表达 | 第35-37页 |
5.3 ROCK-1 与Survivin促进HPASMCs增值信号通路中的关系 | 第37-45页 |
5.3.1 realtime-PCR检测HPASMCs中ROCK-1 与SurvivinmRNA的表达 | 第37-38页 |
5.3.2 Western blot检测HPASMCs中ROCK-1、Survivin蛋白质表达 | 第38-40页 |
5.3.3 CCK8检测HPASMCs增殖 | 第40-41页 |
5.3.4 EDU免疫荧光检测细胞增殖 | 第41-45页 |
第6章 讨论 | 第45-49页 |
第7章 结论 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-55页 |
文献综述 | 第55-63页 |
参考文献 | 第60-63页 |
附录 | 第63-64页 |
致谢 | 第64-65页 |