| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 生物催化与生物转化 | 第9-10页 |
| 1.2 甲羟戊酸 | 第10-13页 |
| 1.2.1 甲羟戊酸简介 | 第10页 |
| 1.2.2 甲羟戊酸的市场前景 | 第10-11页 |
| 1.2.3 甲羟戊酸的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.3 乙酰辅酶A合成酶 | 第13-14页 |
| 1.3.1 乙酰辅酶A合成酶简介 | 第13页 |
| 1.3.2 乙酰辅酶A合成酶研究现状 | 第13-14页 |
| 1.4 选题意义及论文设计思路 | 第14-16页 |
| 1.4.1 选题意义 | 第14-15页 |
| 1.4.2 本论文设计思路 | 第15-16页 |
| 第二章 乙酰辅酶A合成酶蛋白的表达 | 第16-30页 |
| 2.1 引言 | 第16页 |
| 2.2 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.2.1 菌株 | 第16页 |
| 2.2.2 质粒 | 第16-17页 |
| 2.2.3 试剂 | 第17页 |
| 2.2.4 仪器 | 第17-18页 |
| 2.3 实验方法 | 第18-26页 |
| 2.3.1 基因克隆 | 第18-24页 |
| 2.3.1.1 基因/基因组DNA的提取 | 第18-19页 |
| 2.3.1.2 基因扩增 | 第19-20页 |
| 2.3.1.3 质粒与载体的双酶切 | 第20-21页 |
| 2.3.1.4 体外重组 | 第21-22页 |
| 2.3.1.5 大肠杆菌DH5α，BL21(DE3)感受态细胞的制备方法 | 第22页 |
| 2.3.1.6 重组质粒的菌落PCR验证 | 第22-23页 |
| 2.3.1.7 酶切验证 | 第23-24页 |
| 2.3.1.8 测序验证 | 第24页 |
| 2.3.2 蛋白表达 | 第24-26页 |
| 2.3.2.1 重组蛋白的纯化及SDS-PAGE分析 | 第24-26页 |
| 2.3.2.2 重组蛋白的Western Blot分析 | 第26页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第26-29页 |
| 2.4.1 构建重组质粒pET28a-acs，pET28a-acs1，pET28a-acs2 | 第26-27页 |
| 2.4.2 重组蛋白的SDS-PAGE | 第27-28页 |
| 2.4.3 蛋白的Western Blot | 第28-29页 |
| 2.5 本章小结 | 第29-30页 |
| 第三章 乙酰辅酶A合成酶的性质分析 | 第30-39页 |
| 3.1 引言 | 第30-31页 |
| 3.2 实验材料 | 第31页 |
| 3.2.1 试剂 | 第31页 |
| 3.2.2 仪器 | 第31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-34页 |
| 3.3.1 乙酰辅酶A合成酶活性测定 | 第31-33页 |
| 3.3.2 酶活测定计算方法 | 第33-34页 |
| 3.3.3 乙酰辅酶A合成酶的酶学性质分析 | 第34页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第34-38页 |
| 3.4.1 三种乙酰辅酶A合成酶的活性比较 | 第34-35页 |
| 3.4.2 缓冲液对乙酰辅酶A合成酶活性的影响 | 第35页 |
| 3.4.3 温度对乙酰辅酶A合成酶活性的影响 | 第35-36页 |
| 3.4.4 pH对乙酰辅酶A合成酶活性的影响 | 第36-37页 |
| 3.4.5 镁离子浓度对乙酰辅酶A合成酶活性的影响 | 第37-38页 |
| 3.4.6 乙酰辅酶A合成酶的动力学参数 | 第38页 |
| 3.5 本章小结 | 第38-39页 |
| 第四章 乙酰辅酶A合成酶在甲羟戊酸合成中的应用 | 第39-50页 |
| 4.1 引言 | 第39页 |
| 4.2 实验材料 | 第39-40页 |
| 4.2.1 菌株 | 第39页 |
| 4.2.2 质粒 | 第39页 |
| 4.2.3 试剂 | 第39-40页 |
| 4.2.4 仪器 | 第40页 |
| 4.3 实验方法 | 第40-45页 |
| 4.3.1 构建重组质粒pACYC-mvaS-mvaE-acs2 | 第41-43页 |
| 4.3.2 过表达ACS2重组菌发酵的pH优化 | 第43页 |
| 4.3.3 过表达ACS2重组菌发酵的诱导温度优化 | 第43页 |
| 4.3.4 过表达ACS2对发酵合成甲羟戊酸的影响 | 第43-44页 |
| 4.3.5 甲羟戊酸检测方法 | 第44-45页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第45-49页 |
| 4.4.1 重组质粒pACYC-mvaS-mvaE-acs2的构建 | 第45-46页 |
| 4.4.2 该菌株发酵产甲羟戊酸的最适pH | 第46-47页 |
| 4.4.3 该菌株发酵产甲羟戊酸的最适诱导温度 | 第47-48页 |
| 4.4.4 过表达乙酰辅酶A合成酶对甲羟戊酸产量的影响 | 第48-49页 |
| 4.5 本章小结 | 第49-50页 |
| 第五章 结论与展望 | 第50-52页 |
| 5.1 结论 | 第50页 |
| 5.2 展望 | 第50-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录 | 第57页 |
