| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 第一章 玉米大斑病菌致病因子研究进展 | 第17-26页 |
| 1.1 玉米大斑病概况 | 第17页 |
| 1.1.1 玉米大斑病的发生与危害 | 第17页 |
| 1.1.2 凸脐蠕孢菌形态与生物学特性 | 第17页 |
| 1.2 玉米大斑病菌致病因子 | 第17-20页 |
| 1.2.1 毒素的研究 | 第17-18页 |
| 1.2.2 黑色素的研究 | 第18页 |
| 1.2.3 信号传递途径的研究 | 第18-20页 |
| 1.3 SNF1蔗糖非发酵蛋白激酶研究进展 | 第20-25页 |
| 1.3.1 AMPK的发现 | 第20页 |
| 1.3.2 AMPK的结构 | 第20-21页 |
| 1.3.3 SNF1的发现 | 第21页 |
| 1.3.4 SNF1的结构 | 第21-22页 |
| 1.3.5 SNF1的活性调控 | 第22-23页 |
| 1.3.6 SNF1在酵母中的研究 | 第23-25页 |
| 1.3.7 SNF1在植物病原真菌中的研究 | 第25页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 玉米大斑病菌StSNF1基因的克隆 | 第26-35页 |
| 2.1. 试验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂与培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 基因组DNA的提取与质量检测 | 第27-28页 |
| 2.2.2 StSNF1序列的获得与引物设计 | 第28页 |
| 2.2.3 StSNF1基因PCR扩增与亚克隆 | 第28-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-34页 |
| 2.3.1 StSNF1基因序列的获取与引物设计 | 第30-31页 |
| 2.3.2 StSNF1基因的扩增与亚克隆 | 第31页 |
| 2.3.3 StSNF1基因的测序与序列分析 | 第31-34页 |
| 2.4 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 玉米大斑病菌SNF1蛋白的生物信息学分析 | 第35-43页 |
| 3.1 试验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 序列 | 第35页 |
| 3.1.2 软件 | 第35-36页 |
| 3.2 试验方法 | 第36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-42页 |
| 3.3.1 StSNF1蛋白序列的获得 | 第36-37页 |
| 3.3.2 StSNF1和CcSNF1蛋白的理化性质比较 | 第37页 |
| 3.3.3 StSNF1和CcSNF1蛋白的亲水性/疏水性分析 | 第37-38页 |
| 3.3.4 StSNF1和CcSNF1蛋白跨膜结构域及信号肽预测 | 第38页 |
| 3.3.5 StSNF1和CcSNF1蛋白的亚细胞定位预测 | 第38-39页 |
| 3.3.6 StSNF1和CcSNF1蛋白的保守功能域分析 | 第39页 |
| 3.3.7 StSNF1和CcSNF1蛋白的二级结构分析 | 第39-40页 |
| 3.3.8 StSNF1和CcSNF1蛋白的三维结构预测 | 第40-41页 |
| 3.3.9 StSNF1蛋白同源性分析及系统进化分析 | 第41-42页 |
| 3.4 小结 | 第42-43页 |
| 第四章 玉米大斑病菌StSNF1基因的表达分析 | 第43-50页 |
| 4.1 试验材料 | 第43-44页 |
| 4.1.1 供试菌株 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂与培养基 | 第43-44页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第44页 |
| 4.2 试验方法 | 第44-46页 |
| 4.2.1 RNA样品的收集 | 第44页 |
| 4.2.2 总RNA的提取与质量检测 | 第44页 |
| 4.2.3 反转录 | 第44-45页 |
| 4.2.4 引物设计 | 第45页 |
| 4.2.5 引物特异性检测 | 第45-46页 |
| 4.2.6 Real-Time PCR | 第46页 |
| 4.3 结果与分析 | 第46-49页 |
| 4.3.1 RNA浓度与质量检测 | 第46-47页 |
| 4.3.2 引物特异性检测 | 第47页 |
| 4.3.3 玉米大斑病菌不同侵染时期StSNF1的表达分析 | 第47-48页 |
| 4.3.4 玉米大斑病菌分生孢子侵染生长过程中StSNF1的表达分析 | 第48页 |
| 4.3.5 玉米大斑病菌不同碳源培养下StSNF1的表达分析 | 第48-49页 |
| 4.4 小结 | 第49-50页 |
| 第五章 玉米大斑病菌StSNF1基因敲除载体的构建 | 第50-59页 |
| 5.1 试验材料 | 第50-51页 |
| 5.1.1 供试菌株与载体 | 第50页 |
| 5.1.2 主要试剂与培养基 | 第50-51页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第51页 |
| 5.2 试验方法 | 第51-56页 |
| 5.2.1 引物设计 | 第51页 |
| 5.2.2 基因组DNA的提取 | 第51页 |
| 5.2.3 StSNF1基因同源臂的亚克隆 | 第51-53页 |
| 5.2.4 StSNF1同源臂片段的制备 | 第53页 |
| 5.2.5 潮霉素抗性元件与线性化骨架载体的制备 | 第53-54页 |
| 5.2.6 敲除载体的构建策略 | 第54-55页 |
| 5.2.7 潮霉素抗性元件与同源臂的酶切验证 | 第55-56页 |
| 5.3 结果与分析 | 第56-58页 |
| 5.3.1 StSNF1基因同源臂与潮霉素抗性元件的获得及酶切验证 | 第56-57页 |
| 5.3.2 StSNF1敲除载体的构建及酶切验证 | 第57-58页 |
| 5.4 小结 | 第58-59页 |
| 第六章 玉米大斑病菌StSNF1基因的敲除 | 第59-66页 |
| 6.1 试验材料 | 第59-60页 |
| 6.1.1 供试菌株 | 第59页 |
| 6.1.2 主要试剂与培养基 | 第59-60页 |
| 6.1.3 主要仪器 | 第60页 |
| 6.2 试验方法 | 第60-62页 |
| 6.2.1 原生质体制备的条件优化 | 第60页 |
| 6.2.2 SYY1303对潮霉素B的敏感性筛选 | 第60页 |
| 6.2.3 玉米大斑病菌的遗传转化 | 第60-62页 |
| 6.3 结果与分析 | 第62-65页 |
| 6.3.1 原生质体制备的条件优化 | 第62-63页 |
| 6.3.2 潮霉素B的敏感性筛选 | 第63-64页 |
| 6.3.3 转化子的筛选与PCR鉴定 | 第64-65页 |
| 6.4 小结 | 第65-66页 |
| 第七章 结论与讨论 | 第66-68页 |
| 7.1 玉米大斑病菌StSNF1基因的克隆与生物信息学分析 | 第66页 |
| 7.2 玉米大斑病菌StSNF1基因的表达分析 | 第66-67页 |
| 7.3 玉米大斑病菌StSNF1基因敲除载体的构建 | 第67页 |
| 7.4 玉米大斑病菌StSNF1基因的敲除 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第77页 |
