| 缩写词 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 一 文献综述 | 第11-24页 |
| 1 基于二代测序的转录组研究进展 | 第11-14页 |
| 1.1 转录组学的研究 | 第11页 |
| 1.2 RNA-seq | 第11-14页 |
| 1.2.1 RNA-seq与药用植物 | 第12-13页 |
| 1.2.2 RNA-seq与油料作物 | 第13页 |
| 1.2.3 RNA-seq与分子标记开发 | 第13-14页 |
| 2 植物油脂研究概述 | 第14-21页 |
| 2.1 植物油脂的合成过程 | 第14-16页 |
| 2.2 油脂合成的分子调控 | 第16-19页 |
| 2.2.1 从头合成阶段 | 第16页 |
| 2.2.2 碳链延长阶段 | 第16页 |
| 2.2.3 脱饱和阶段 | 第16-17页 |
| 2.2.4 TAG重塑阶段 | 第17-18页 |
| 2.2.5 油脂合成相关的转录因子 | 第18-19页 |
| 2.3 多不饱和脂肪酸的研究 | 第19-21页 |
| 2.3.1 多不饱和脂肪酸的营养与保健作用 | 第20页 |
| 2.3.2 多不饱和脂肪酸与植物抗性的研究 | 第20-21页 |
| 3 紫苏 ω-3 脂肪酸脱饱和酶研究进展 | 第21-22页 |
| 4 基因工程在油脂合成调控及生产中的应用 | 第22-23页 |
| 5 研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 二 材料和方法 | 第24-39页 |
| 1 试验材料 | 第24-26页 |
| 1.1 植物材料 | 第24页 |
| 1.2 质粒和菌株 | 第24页 |
| 1.3 主要试剂及配制 | 第24-25页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2 试验方法 | 第26-39页 |
| 2.1 紫苏种子RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2 紫苏不同发育时期种子转录组测序 | 第27页 |
| 2.3 转录组测序结果分析 | 第27-29页 |
| 2.4 紫苏 ω-3FAD基因的筛选 | 第29页 |
| 2.5 pfFAD3基因克隆 | 第29-30页 |
| 2.5.1 cDNA制备 | 第29页 |
| 2.5.2 pfFAD3基因的扩增引物设计 | 第29页 |
| 2.5.3 PCR扩增目的基因 | 第29-30页 |
| 2.6 pfFAD3的定量表达分析 | 第30-31页 |
| 2.6.1 pfFAD3基因的Real-time PCR引物设计 | 第30-31页 |
| 2.6.2 pfFAD3基因的差异表达检测 | 第31页 |
| 2.7 pfFAD3重组工程菌的创制 | 第31-35页 |
| 2.7.1 克隆载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.7.2 表达载体的构建与转化 | 第32-34页 |
| 2.7.3 工程菌株鉴定和菌种保存 | 第34-35页 |
| 2.8 工程菌的重组蛋白 | 第35-36页 |
| 2.8.1 工程菌诱导表达 | 第35页 |
| 2.8.2 重组FAD3蛋白的纯化和检测 | 第35-36页 |
| 2.9 工程菌脂肪酸含量检测 | 第36-37页 |
| 2.10 紫苏密码子偏好性分析 | 第37页 |
| 2.10.1 紫苏种子蛋白质编码基因密码子特性分析 | 第37页 |
| 2.10.2 紫苏种子表达基因有效密码子数分析 | 第37页 |
| 2.10.3 紫苏种子表达基因同义密码子相对使用度分析 | 第37页 |
| 2.10.4 紫苏种子表达基因最优密码子分析 | 第37页 |
| 2.11 pfFAD3s基因异源表达分析 | 第37-39页 |
| 三 结果与分析 | 第39-68页 |
| 1 紫苏种子形成时期的转录组数据分析结果 | 第39-51页 |
| 2 紫苏pfFAD3s基因的特性 | 第51-57页 |
| 3 重组工程菌的获得 | 第57-60页 |
| 3.1 克隆载体的鉴定结果 | 第57-59页 |
| 3.2 重组工程菌的鉴定结果 | 第59-60页 |
| 4 pfFAD3原核表达情况 | 第60-62页 |
| 4.1 pfFAD3的诱导表达结果 | 第60-61页 |
| 4.2 pfFAD3基因表达对脂肪酸合成的影响 | 第61-62页 |
| 5 紫苏种子密码子偏好使用情况 | 第62-68页 |
| 5.1 蛋白质编码基因密码子特性 | 第62-63页 |
| 5.2 紫苏种子表达基因有效密码子数特性 | 第63-64页 |
| 5.3 同义密码子相对使用度 | 第64-65页 |
| 5.4 最优密码子分布 | 第65-66页 |
| 5.5 pfFAD3s异源表达的最适宿主 | 第66-68页 |
| 四 讨论 | 第68-72页 |
| 五 总结 | 第72-73页 |
| 1 结论 | 第72页 |
| 2 创新及展望 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 项目资助 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-84页 |
