| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 第1章 文献研究 | 第12-16页 |
| 1.1 登革病毒EDⅢ蛋白结构的研究 | 第12-13页 |
| 1.2 以登革热EDⅢ蛋白为基础的疫苗研究进展 | 第13页 |
| 1.3 以登革热EDⅢ蛋白为基础的血清抗体分型的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4 小结与展望 | 第14-16页 |
| 第2章 登革1型和2型病毒包膜蛋白EDⅢ的原核表达、鉴定和纯化 | 第16-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-20页 |
| 2.1.1 病毒株和感受态细胞 | 第16页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第16-17页 |
| 2.1.3 主要试剂及耗材 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第18-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-26页 |
| 2.2.1 登革1型和2型病毒核酸提取和逆转录 | 第20页 |
| 2.2.2 登革1型和2型病毒EDⅢ基因片段PCR扩增和纯化回收 | 第20-21页 |
| 2.2.3 pET28b载体和EDⅢ的双酶切反应 | 第21-22页 |
| 2.2.4 pET28b和EDⅢ的连接反应 | 第22页 |
| 2.2.5 连接反应产物转化BL21感受态细胞 | 第22-23页 |
| 2.2.6 重组质粒鉴定 | 第23页 |
| 2.2.7 IPTG诱导表达EDⅢ重组蛋白 | 第23-24页 |
| 2.2.8 EDⅢ重组蛋白SDS-PAGE电泳分析和质谱鉴定 | 第24页 |
| 2.2.9 EDⅢ重组蛋白的大量表达、洗涤和溶解 | 第24-25页 |
| 2.2.10 EDⅢ重组蛋白的纯化和透析除盐 | 第25-26页 |
| 2.3 实验结果 | 第26-31页 |
| 2.3.1 EDⅢ基因扩增 | 第26页 |
| 2.3.2 pET28b-EDⅢ重组表达载体的鉴定 | 第26-28页 |
| 2.3.3 EDⅢ重组蛋白的诱导表达 | 第28-29页 |
| 2.3.4 EDⅢ重组蛋白的质谱鉴定 | 第29-31页 |
| 2.3.5 EDⅢ重组蛋白的纯化 | 第31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-34页 |
| 第3章 登革1型和2型病毒血清抗体分型ELISA的建立与应用 | 第34-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.1.1 病毒株、细胞株及感受态细胞 | 第34页 |
| 3.1.2 登革热患者血清样本 | 第34页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第34页 |
| 3.1.4 主要试剂及耗材 | 第34页 |
| 3.1.5 主要试剂配制 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-40页 |
| 3.2.1 重组蛋白EDⅢ的HRP标记 | 第34-35页 |
| 3.2.2 酶标记物EDⅢ-HRP的分离纯化 | 第35-36页 |
| 3.2.3 登革1型和2型病毒血清抗体分型ELISA条件初步摸索 | 第36-37页 |
| 3.2.4 登革1型和2型病毒血清抗体分型ELISA条件优化 | 第37-38页 |
| 3.2.5 登革1型和2型病毒血清抗体分型ELISA法的敏感性评价 | 第38页 |
| 3.2.6 PRNT方法的建立及检测结果分析 | 第38-39页 |
| 3.2.7 利用分型ELISA分析登革病毒抗体的变化规律 | 第39-40页 |
| 3.2.8 统计学分析 | 第40页 |
| 3.3 实验结果 | 第40-48页 |
| 3.3.1 EDⅢ重组蛋白的HRP标记 | 第40页 |
| 3.3.2 EDⅢ重组蛋白酶标记物的分离纯化 | 第40-41页 |
| 3.3.3 登革病毒抗体分型ELISA法建立和优化 | 第41-44页 |
| 3.3.4 自建分型ELISA检测方法的灵敏度分析 | 第44-45页 |
| 3.3.5 分型ELISA方法在检测中的交叉反应情况分析 | 第45-46页 |
| 3.3.6 PRNT的建立及检测结果分析 | 第46-47页 |
| 3.3.7 自建1型抗体ELISA与PRNT相关性分析 | 第47-48页 |
| 3.3.8 分型ELISA在检测DF患者血清抗体动态变化中的应用 | 第48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-52页 |
| 结语 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 在校期间发表论文情况 | 第58-59页 |
| 统计学审核证明 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
