| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩略语 | 第8-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-31页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 1. 植物抗病机制 | 第15-23页 |
| 1.1 植物抗病基因 | 第15-17页 |
| 1.1.1 R基因的类型 | 第15-16页 |
| 1.1.2 R基因的功能与抗病机理 | 第16-17页 |
| 1.2 植物防卫体系 | 第17-19页 |
| 1.2.1 植物防御体系 | 第17页 |
| 1.2.2 植物防御过程的相关生理生化反应 | 第17-18页 |
| 1.2.3 植物的系统抗性 | 第18-19页 |
| 1.3 植物基因功能分析 | 第19-23页 |
| 1.3.1 基因的突变分析 | 第19-20页 |
| 1.3.2 基因的表达分析 | 第20-22页 |
| 1.3.3 蛋白质序列分析 | 第22-23页 |
| 2. 甜瓜及甜瓜病害 | 第23-26页 |
| 2.1 甜瓜 | 第23页 |
| 2.2 甜瓜霜霉病 | 第23-24页 |
| 2.3 甜瓜抗霜霉病研究进展 | 第24-26页 |
| 2.3.1 抗霜霉病基因 | 第24页 |
| 2.3.2 霜霉病抗性遗传 | 第24-26页 |
| 2.3.3 甜瓜霜霉病“酶抗性“机制 | 第26页 |
| 3. 丝氨酸乙醛酸氨基转移酶（SGT）研究进展 | 第26-29页 |
| 3.1 SGT酶在植物发育中作用 | 第26-27页 |
| 3.2 SGT酶结构与活性 | 第27页 |
| 3.3 SGT酶基因克隆与表达分析 | 第27页 |
| 3.4 SGT酶参与植物抗逆过程 | 第27-28页 |
| 3.5 eR在抗病反应中的作用 | 第28-29页 |
| 4. 研究目的与意义 | 第29-31页 |
| 第二部分 实验部分 | 第31-86页 |
| 第一章 AT2基因的克隆、序列分析与表达特性分析 | 第31-47页 |
| 1.1 材料 | 第31-33页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第31页 |
| 1.1.2 载体及菌株 | 第31页 |
| 1.1.3 实验试剂 | 第31-32页 |
| 1.1.4 培养基、激素及缓冲液配制 | 第32页 |
| 1.1.5 主要仪器和设备 | 第32-33页 |
| 1.2 实验方法 | 第33-38页 |
| 1.2.1 甜瓜RNA提取 | 第33页 |
| 1.2.2 甜瓜cDNA的合成 | 第33-34页 |
| 1.2.3 PCR引物 | 第34页 |
| 1.2.4 PCR扩增 | 第34-35页 |
| 1.2.5 PCR扩增产物回收 | 第35-36页 |
| 1.2.6 PCR产物克隆 | 第36页 |
| 1.2.7 连接产物的转化 | 第36页 |
| 1.2.8 重组质粒pMD18TS-AT2的提取 | 第36-37页 |
| 1.2.9 重组质粒pMD18TS-AT2的鉴定 | 第37页 |
| 1.2.10 测序及分析 | 第37页 |
| 1.2.11 克隆片段序列及结构分析 | 第37-38页 |
| 1.3 结果与分析 | 第38-45页 |
| 1.3.1 甜瓜总RNA的提取 | 第38-39页 |
| 1.3.2 甜瓜cDNA合成 | 第39-40页 |
| 1.3.3 AT2基因的克隆及回收 | 第40页 |
| 1.3.4 重组质粒pMD18TS-AT2鉴定 | 第40-41页 |
| 1.3.5 AT2基因的序列分析 | 第41-44页 |
| 1.3.6 蛋白质二级结构分析 | 第44-45页 |
| 1.3.7 AT2基因在甜瓜不同组织及不同发育时期的表达特征 | 第45页 |
| 1.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第二章 植物表达载体的构建 | 第47-53页 |
| 2.1 材料 | 第47-48页 |
| 2.1.1 质粒 | 第47页 |
| 2.1.2 菌株 | 第47页 |
| 2.1.3 试剂 | 第47页 |
| 2.1.4 培养基和抗生素配制 | 第47-48页 |
| 2.1.5 主要仪器和设备 | 第48页 |
| 2.2 实验方法 | 第48-50页 |
| 2.2.1 提取pMD18TS-AT2质粒（方法同 1.2.8） | 第48页 |
| 2.2.2 酶切反应 | 第48页 |
| 2.2.3 DNA片段回收（方法同 1.2.5） | 第48页 |
| 2.2.4 重组载体的构建 | 第48-49页 |
| 2.2.5 连接产物转化大肠杆菌 | 第49-50页 |
| 2.2.6 重组质粒的检测 | 第50页 |
| 2.3 结果与分析 | 第50-51页 |
| 2.3.1 pMD18TS-AT2质粒提取 | 第50-51页 |
| 2.3.2 双酶切鉴定重组质粒 | 第51页 |
| 2.3.3 菌落PCR鉴定重组质粒 | 第51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 AT2遗传转化及转基因植株检测 | 第53-72页 |
| 3.1 材料 | 第53-56页 |
| 3.1.0 植物材料 | 第53页 |
| 3.1.1 种子消毒处理及外植体获得 | 第53页 |
| 3.1.2 菌株 | 第53页 |
| 3.1.3 主要试剂及配制方法 | 第53-54页 |
| 3.1.4 培养基及配制 | 第54-56页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-61页 |
| 3.2.1 甜瓜外植体对抗生素的敏感性试验 | 第56页 |
| 3.2.2 甜瓜遗传转化 | 第56-60页 |
| 3.2.3 烟草遗传转化 | 第60-61页 |
| 3.2.4 实时荧光定量 PCR 分析转基因植株 AT2 基因表达量 | 第61页 |
| 3.3 结果与分析 | 第61-70页 |
| 3.3.1 甜瓜遗传转化Kan筛选浓度的确定 | 第61-62页 |
| 3.3.2 头孢噻肟钠浓度的确定 | 第62-63页 |
| 3.3.3 转基因甜瓜植株性状分析 | 第63-65页 |
| 3.3.4 转基因烟草植株性状分析 | 第65-66页 |
| 3.3.5 转基因甜瓜、烟草PCR鉴定 | 第66-67页 |
| 3.3.6 转基因烟草遗传分析 | 第67-68页 |
| 3.3.7 转基因烟草T_1PCR鉴定 | 第68-69页 |
| 3.3.8 qRT-PCR分析转基因甜瓜和烟草AT2基因表达量 | 第69-70页 |
| 3.4 讨论 | 第70-72页 |
| 第四章 转AT2基因植株丝氨酸乙醛酸转氨酶活性分析、抗病性鉴定及生理生化分析 | 第72-86页 |
| 4.1 材料 | 第72-73页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第72页 |
| 4.1.2 菌株 | 第72页 |
| 4.1.3 主要试剂及配制方法 | 第72-73页 |
| 4.1.4 主要仪器和设备 | 第73页 |
| 4.2 实验方法 | 第73-77页 |
| 4.2.1 转基因植株抗病性鉴定 | 第73-74页 |
| 4.2.1.1 甜瓜霜霉病接种方法 | 第73页 |
| 4.2.1.2 靶斑病菌培养及接种方法 | 第73-74页 |
| 4.2.2 叶片蛋白提取 | 第74页 |
| 4.2.2.1 转基因甜瓜叶片总蛋白提取 | 第74页 |
| 4.2.2.2 转基因烟草叶片总蛋白提取 | 第74页 |
| 4.2.2.3 总蛋白标定 | 第74页 |
| 4.2.3 转基因植株叶片丝氨酸乙醛酸转氨酶及乙醇酸氧化酶活性分析 | 第74-75页 |
| 4.2.4 转基因植株对生物胁迫响应的生理生化分析 | 第75-77页 |
| 4.3 结果与分析 | 第77-84页 |
| 4.3.1 转基因植株抗病性鉴定 | 第77-81页 |
| 4.3.1.1 转基因植株SGT酶活检测 | 第77-79页 |
| 4.3.1.2 生物胁迫下转基因植株生理生化分析 | 第79-81页 |
| 4.3.2 转基因植株抗性鉴定 | 第81-84页 |
| 4.3.2.1 转基因甜瓜抗性鉴定 | 第82-83页 |
| 4.3.2.2 转基因烟草抗性鉴定 | 第83-84页 |
| 4.4 讨论 | 第84-86页 |
| 第三部分 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
