| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第10-13页 |
| 2 试验材料 | 第13-15页 |
| 2.1 植物材料 | 第13页 |
| 2.2 毒源 | 第13页 |
| 2.3 试验中使用的菌株 | 第13页 |
| 2.4 试验中所使用的培养基以及营养液 | 第13-15页 |
| 3 试验方法 | 第15-25页 |
| 3.1 植物材料培养以及病毒接种方法 | 第15页 |
| 3.2 引物设计 | 第15-17页 |
| 3.3 VIGS载体构建 | 第17-22页 |
| 3.3.1 健康大豆J7 叶片总RNA的提取 | 第17页 |
| 3.3.2 cDNA的合成 | 第17-18页 |
| 3.3.3 特异性扩增目的基因 | 第18页 |
| 3.3.4 PCR产物双酶切 | 第18-19页 |
| 3.3.5 酶切产物回收 | 第19页 |
| 3.3.6 回收的PCR产物连接pTRV-RNA2 载体 | 第19-20页 |
| 3.3.7 连接产物转化大肠杆菌感受态DH5α | 第20页 |
| 3.3.8 提取质粒 | 第20-21页 |
| 3.3.9 质粒双酶切验证及送测序 | 第21页 |
| 3.3.10 农杆菌GV3101 感受态细胞的制备 | 第21页 |
| 3.3.11 阳性克隆质粒转化农杆菌GV3101 感受态细胞 | 第21-22页 |
| 3.4 沉默大豆GmCalS7 基因再接种N3 病毒后观察胼胝质 | 第22-23页 |
| 3.4.1 大豆叶片注射农杆菌准备 | 第22页 |
| 3.4.2 大豆叶片接种TRV：GmPDS后表型观察及RNA提取 | 第22-23页 |
| 3.4.3 大豆叶片接种TRV：GmCalS7 后半定量检测目的基因的表达 | 第23页 |
| 3.4.4 大豆叶片第二轮复叶接种SMV株系N3 后对胼胝质进行荧光显微镜观察 | 第23页 |
| 3.5 沉默大豆GmNHX1 基因，GmNHX5 基因后检测植株耐盐性 | 第23-25页 |
| 4 试验结果 | 第25-37页 |
| 4.1 指示基因VIGS载体的构建以及半定量检测 | 第25-27页 |
| 4.1.1 大豆GmPDS基因的克隆与构建载体的验证 | 第25页 |
| 4.1.2 指示基因沉默后的表型观察以及半定量检测 | 第25-27页 |
| 4.2 大豆品种接种TRV病毒对SMV侵染的影响 | 第27-29页 |
| 4.3 GmCalS7 基因VIGS载体的构建以及相关检测 | 第29-32页 |
| 4.3.1 大豆GmCalS7 基因的克隆与构建载体的验证 | 第29-30页 |
| 4.3.2 GmCalS7 基因沉默后的半定量检测 | 第30页 |
| 4.3.3 转基因植株接种N3 病毒后胼胝质荧光显微镜观察 | 第30-31页 |
| 4.3.4 转基因植株接种N3 病毒的当位叶以及上位叶CP检测 | 第31-32页 |
| 4.4 GmNHX1 基因以及GmNHX5 基因VIGS载体的构建以及相关检测 | 第32-37页 |
| 4.4.1 大豆GmNHX1 基因的克隆与构建载体的验证 | 第33页 |
| 4.4.2 指示基因沉默后的表型观察以及半定量检测 | 第33-34页 |
| 4.4.3 GmNHX1 基因沉默后半定量检测以及耐盐性观察 | 第34页 |
| 4.4.4 大豆GmNHX5 基因的克隆与构建载体的验证 | 第34-35页 |
| 4.4.5 GmNHX5 基因沉默后的半定量RT-PCR分析检测以及耐盐性观察 | 第35-37页 |
| 5 讨论 | 第37-39页 |
| 6 结论 | 第39-40页 |
| 7 参考文献 | 第40-43页 |
| 作者简介 | 第43-44页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
