| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 HPV基因组学特征 | 第12-14页 |
| 1.1 HPV分子生物学学特征 | 第12-13页 |
| 1.2 HPV基因组结构特点 | 第13-14页 |
| 1.3 HPV分类 | 第14页 |
| 2 HPV感染机制研究 | 第14-15页 |
| 3 HPV流行病学 | 第15-17页 |
| 3.1 HPV的流行现状 | 第15-17页 |
| 3.2 HPV相关疾病 | 第17页 |
| 4 HPV的诊断、筛查及其相关疫苗 | 第17-19页 |
| 4.1 HPV的检测方法 | 第17-18页 |
| 4.2 HPV相关疫苗 | 第18-19页 |
| 5 HPV L1蛋白的制备 | 第19-20页 |
| 6 本研究的目的、意义 | 第20页 |
| 7 本研究主要研究内容及技术路线 | 第20-24页 |
| 7.1 本研究主要研究内容分为两部分 | 第20-21页 |
| 7.2 本研究技术路线 | 第21-24页 |
| 第二章 HPV 33 亚型L1基因导入水稻及转基因植株的鉴定 | 第24-36页 |
| 1 材料 | 第24-27页 |
| 1.1 质粒、菌株 | 第24页 |
| 1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第24-27页 |
| 1.3.1 培养基的配制 | 第24-25页 |
| 1.3.2 相关培养基母液的配制 | 第25-26页 |
| 1.3.3 相关激素的配制 | 第26页 |
| 1.3.4 相关抗生素储备液的配制 | 第26-27页 |
| 1.3.5 CTAB相关试剂配制 | 第27页 |
| 1.4 植物材料 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-30页 |
| 2.1 目的基因及引物的设计与合成 | 第27页 |
| 2.2 目的片段和载体的双酶切及回收 | 第27-28页 |
| 2.3 中间载体pMP3-HPV33 L1的构建 | 第28页 |
| 2.4 中间载体pMP3-HPV33 L1转入DH5α | 第28页 |
| 2.5 中间载体pMP3-HPV33 L1的鉴定 | 第28页 |
| 2.6 构建HPV-33 L1重组植物表达载体载体 | 第28页 |
| 2.7 重组植物表达载体转入根癌农杆菌EHA105 | 第28-29页 |
| 2.8 重组植物表达载体的鉴定 | 第29页 |
| 2.9 水稻的遗传转化 | 第29页 |
| 2.10 转基因水稻的PCR检测 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-34页 |
| 3.1 中间载体的构建与鉴定 | 第30-31页 |
| 3.2 植物表达载体的构建与鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3 植物表达载体转入根癌农杆菌EHA105菌株的鉴定 | 第32-33页 |
| 3.4 转基因水稻植株的PCR鉴定 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-35页 |
| 5 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 HPV33 L1蛋白在大肠杆菌中的表达及其免疫原性的鉴定 | 第36-58页 |
| 1 材料 | 第36-39页 |
| 1.1 菌株及载体 | 第36页 |
| 1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 1.3 主要仪器和耗材 | 第36-38页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第38-39页 |
| 2 方法 | 第39-48页 |
| 2.1 重组表达载体的构建 | 第39-41页 |
| 2.1.1 目的基因及引物的设计与合成 | 第39页 |
| 2.1.2 目的片段的获得 | 第39-40页 |
| 2.1.3 目的片段及载体的双酶切及回收 | 第40页 |
| 2.1.4 重组载体构建 | 第40页 |
| 2.1.5 转化 | 第40-41页 |
| 2.1.6 重组表达载体的鉴定 | 第41页 |
| 2.2 原核表达载体的初步鉴定 | 第41-43页 |
| 2.2.1 12%SDS-PAGE鉴定 | 第41-42页 |
| 2.2.2 免疫印迹实验鉴定 | 第42-43页 |
| 2.3 L1蛋白表达条件的优化 | 第43-44页 |
| 2.3.1 最适IPTG浓度的优化 | 第43页 |
| 2.3.2 最适诱导温度的优化 | 第43-44页 |
| 2.3.3 最适诱导时间的优化 | 第44页 |
| 2.4 重组蛋白HPV33-L1的可溶性分析 | 第44页 |
| 2.5 L1蛋白的纯化及VLP的鉴定 | 第44-46页 |
| 2.5.1 Ni-NTA亲和色谱法纯化蛋白 | 第44-45页 |
| 2.5.2 纯化产物鉴定 | 第45-46页 |
| 2.5.2.1 12%SDS-PAGE鉴定 | 第45页 |
| 2.5.2.2 血凝 | 第45-46页 |
| 2.5.2.3 透射电子显微镜 | 第46页 |
| 2.6 动物免疫及免疫评价 | 第46-48页 |
| 2.6.1 动物免疫方案 | 第46页 |
| 2.6.2 动物免疫评价 | 第46-48页 |
| 2.6.2.1 优化包被原的工作浓度 | 第47页 |
| 2.6.2.2 间接ELISA检测免疫血清效价 | 第47-48页 |
| 2.6.2.3 间接ELISA检测免疫血清抗体消长规律 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-56页 |
| 3.1 重组表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 3.1.1 目的片段的获得 | 第48-49页 |
| 3.1.2 目的片段及载体的双酶切及回收 | 第49页 |
| 3.1.3 重组表达载体的菌液PCR鉴定 | 第49-50页 |
| 3.1.4 重组表达载体的双酶切及测序鉴定 | 第50页 |
| 3.1.5 重组表达菌株的构建 | 第50页 |
| 3.2 原核表达载体的初步鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3 原核表达系统最表达条件的优化 | 第51-53页 |
| 3.3.1 最适IPTG浓度的优化 | 第51页 |
| 3.3.2 最适温度的优化 | 第51-52页 |
| 3.3.3 最适诱导时间的优化 | 第52-53页 |
| 3.4 重组蛋白HPV33-L1的可溶性分析 | 第53页 |
| 3.5 L1蛋白的纯化及VLPs的鉴定 | 第53-55页 |
| 3.5.1 重组L1蛋白的纯化及鉴定 | 第53-54页 |
| 3.5.2 血凝HA | 第54页 |
| 3.5.3 透射电子显微镜 | 第54-55页 |
| 3.6 动物免疫评价 | 第55-56页 |
| 3.6.1 免疫血清效价测定 | 第55-56页 |
| 3.6.2 不同免疫小组血清效价消长规律 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 5 本章小结 | 第57-58页 |
| 全文总结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 个人简历 | 第68页 |
