| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略表 | 第21-23页 |
| 1 绪论 | 第23-43页 |
| 1.1 核受体ER的研究进展 | 第24-32页 |
| 1.1.1 ER的发现 | 第24页 |
| 1.1.2 ER的结构 | 第24-26页 |
| 1.1.3 ER的转录 | 第26-31页 |
| 1.1.4 ER与肿瘤的关系 | 第31-32页 |
| 1.2 叉头蛋白FOX家族的研究进展 | 第32-40页 |
| 1.2.1 FOX家族 | 第32-33页 |
| 1.2.2 FOX蛋白的结构 | 第33-34页 |
| 1.2.3 FOX蛋白的翻译后修饰 | 第34-37页 |
| 1.2.4 FOX蛋白与肿瘤 | 第37-40页 |
| 1.3 本论文的选题依据和研究内容 | 第40-43页 |
| 1.3.1 选题依据 | 第40-41页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第41-43页 |
| 2 FOXK2与ERα在乳腺癌中的相关性 | 第43-51页 |
| 2.1 引言 | 第43页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第43-45页 |
| 2.2.1 仪器 | 第43-44页 |
| 2.2.2 试剂 | 第44-45页 |
| 2.2.3 乳腺癌样本 | 第45页 |
| 2.3 实验 | 第45-47页 |
| 2.3.1 免疫组织化学 | 第45页 |
| 2.3.2 细胞培养 | 第45页 |
| 2.3.3 蛋白样品制备 | 第45-46页 |
| 2.3.4 Bradfold法测定蛋白浓度 | 第46页 |
| 2.3.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第46-47页 |
| 2.3.6 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB) | 第47页 |
| 2.4 结果 | 第47-50页 |
| 2.4.1 FOXK2和ERα在人乳腺癌组织中的相关性 | 第47-49页 |
| 2.4.2 FOXK2和ERα在人乳腺癌细胞系中的相关性 | 第49-50页 |
| 2.5 讨论 | 第50页 |
| 2.6 小结 | 第50-51页 |
| 3 FOXK2与ERα之间的相互作用 | 第51-66页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第51-54页 |
| 3.2.1 仪器 | 第51-52页 |
| 3.2.2 试剂 | 第52-53页 |
| 3.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第53-54页 |
| 3.3 实验 | 第54-58页 |
| 3.3.1 Flag-FOXK2截短缺失体质粒构建 | 第54-55页 |
| 3.3.2 质粒转化 | 第55页 |
| 3.3.3 用质粒小提中量试剂盒进行质粒提取 | 第55-56页 |
| 3.3.4 酶切鉴定 | 第56页 |
| 3.3.5 质粒测序 | 第56页 |
| 3.3.6 细胞培养 | 第56页 |
| 3.3.7 质粒转染 | 第56-57页 |
| 3.3.8 蛋白样品制备 | 第57页 |
| 3.3.9 Bradfold法测定蛋白浓度 | 第57页 |
| 3.3.10 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第57页 |
| 3.3.11 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB) | 第57页 |
| 3.3.12 蛋白质免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP) | 第57页 |
| 3.3.13 哺乳动物细胞双杂交(Mammalian two hybrid assay) | 第57-58页 |
| 3.3.14 免疫荧光(Immunofluorescence) | 第58页 |
| 3.4 结果 | 第58-64页 |
| 3.4.1 内源FOXK2和ERα之间的相互作用 | 第58-60页 |
| 3.4.2 外源FOXK2和ERα之间的相互作用 | 第60-62页 |
| 3.4.3 FOXK2和ERα之间相互作用区域的确定 | 第62-64页 |
| 3.4.4 FOXK2和ERα在MCF-7细胞中的分布 | 第64页 |
| 3.5 讨论 | 第64-65页 |
| 3.6 小结 | 第65-66页 |
| 4 FOXK2对ERα蛋白水平的影响 | 第66-79页 |
| 4.1 引言 | 第66页 |
| 4.2 仪器与试剂 | 第66-68页 |
| 4.2.1 仪器 | 第66-67页 |
| 4.2.2 试剂 | 第67-68页 |
| 4.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第68页 |
| 4.3 实验 | 第68-71页 |
| 4.3.1 质粒提取 | 第68页 |
| 4.3.2 细胞培养 | 第68页 |
| 4.3.3 质粒转染 | 第68-69页 |
| 4.3.4 蛋白样品制备 | 第69页 |
| 4.3.5 Bradfold法测定蛋白浓度 | 第69页 |
| 4.3.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第69页 |
| 4.3.7 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB) | 第69页 |
| 4.3.8 蛋白质免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP) | 第69页 |
| 4.3.9 反转录PCR | 第69-71页 |
| 4.4 结果 | 第71-77页 |
| 4.4.1 FOXK2对ERα蛋白水平的影响 | 第71-72页 |
| 4.4.2 FOXK2对ERα mRNA水平的影响 | 第72-74页 |
| 4.4.3 FOXK2对ERα蛋白降解的影响 | 第74页 |
| 4.4.4 FOXK2对ERα蛋白稳定性的影响 | 第74-76页 |
| 4.4.5 FOXK2对ERα泛素化水平的影响 | 第76-77页 |
| 4.5 讨论 | 第77-78页 |
| 4.6 小结 | 第78-79页 |
| 5 BARD1在FOXK2调控ERα蛋白水平过程中的作用 | 第79-90页 |
| 5.1 引言 | 第79页 |
| 5.2 仪器与试剂 | 第79-81页 |
| 5.2.1 仪器 | 第79-80页 |
| 5.2.2 试剂 | 第80-81页 |
| 5.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第81页 |
| 5.3 实验 | 第81-82页 |
| 5.3.1 质粒提取 | 第81页 |
| 5.3.2 细胞培养 | 第81页 |
| 5.3.3 质粒转染 | 第81页 |
| 5.3.4 蛋白样品制备 | 第81页 |
| 5.3.5 Bradfold法测定蛋白浓度 | 第81页 |
| 5.3.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第81页 |
| 5.3.7 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB) | 第81-82页 |
| 5.3.8 蛋白质免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP) | 第82页 |
| 5.3.9 免疫荧光(Immunofluorescence) | 第82页 |
| 5.4 结果 | 第82-89页 |
| 5.4.1 FOXK2与BARD1的相互作用 | 第82-84页 |
| 5.4.2 FOXK2和BARD1相互作用结构域的确定 | 第84-85页 |
| 5.4.3 FOXK2和BARD1在MCF-7细胞中的分布 | 第85-86页 |
| 5.4.4 FOXK2对ERα与BARD1相互作用的影响 | 第86-87页 |
| 5.4.5 FOXK2和BARD1对ERα泛素化水平的影响 | 第87-89页 |
| 5.5 讨论 | 第89页 |
| 5.6 小结 | 第89-90页 |
| 6 FOXK2对ERα转录活性的影响 | 第90-102页 |
| 6.1 引言 | 第90页 |
| 6.2 仪器与试剂 | 第90-92页 |
| 6.2.1 仪器 | 第90-91页 |
| 6.2.2 试剂 | 第91页 |
| 6.2.3 菌种、细胞及质粒 | 第91-92页 |
| 6.3 实验 | 第92-94页 |
| 6.3.1 质粒提取 | 第92页 |
| 6.3.2 细胞培养 | 第92页 |
| 6.3.3 质粒转染 | 第92页 |
| 6.3.4 荧光素酶报告基因实验 | 第92页 |
| 6.3.5 蛋白样品制备 | 第92页 |
| 6.3.6 Bradfold法测定蛋白浓度 | 第92-93页 |
| 6.3.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第93页 |
| 6.3.8 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB) | 第93页 |
| 6.3.9 反转录PCR | 第93页 |
| 6.3.10 实时定量PCR(Real-time-PCR) | 第93-94页 |
| 6.4 结果 | 第94-100页 |
| 6.4.1 FOXK2对ERα转录活性的影响 | 第94-96页 |
| 6.4.2 FOXK2缺失体对ERα转录活性的影响 | 第96-98页 |
| 6.4.3 FOXK2对ERα下游靶基因mRNA水平的影响 | 第98-100页 |
| 6.5 讨论 | 第100-101页 |
| 6.6 小结 | 第101-102页 |
| 7 FOXK2对ERα促乳腺癌细胞增殖功能的影响 | 第102-111页 |
| 7.1 引言 | 第102页 |
| 7.2 仪器与试剂 | 第102-103页 |
| 7.2.1 仪器 | 第102页 |
| 7.2.2 试剂 | 第102页 |
| 7.2.3 细胞及质粒 | 第102-103页 |
| 7.3 实验 | 第103-104页 |
| 7.3.1 质粒提取 | 第103页 |
| 7.3.2 细胞培养 | 第103页 |
| 7.3.3 质粒转染 | 第103页 |
| 7.3.4 细胞集落形成 | 第103页 |
| 7.3.5 MTT检测细胞增殖 | 第103-104页 |
| 7.3.6 流式细胞仪检测细胞周期 | 第104页 |
| 7.4 结果 | 第104-109页 |
| 7.4.1 FOXK2对ERα促乳腺癌细胞增殖能力的影响 | 第104-108页 |
| 7.4.2 FOXK2和ERα对乳腺癌细胞细胞周期的影响 | 第108-109页 |
| 7.5 讨论 | 第109-110页 |
| 7.6 小结 | 第110-111页 |
| 8 结论与展望 | 第111-113页 |
| 8.1 结论 | 第111页 |
| 8.2 创新点摘要 | 第111-112页 |
| 8.3 展望 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-127页 |
| 作者简介 | 第127页 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 | 第127-130页 |
| 致谢 | 第130页 |
