| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1.1 主要植物次生代谢物生物合成途径研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2 生物技术在植物次生代谢途径研发中的应用 | 第14-20页 |
| 1.2.1 发根农杆菌介导遗传转化的原理 | 第15页 |
| 1.2.2 过表达技术的原理和应用 | 第15-19页 |
| 1.2.3 利用生物技术调控植物次生代谢的研究现状 | 第19-20页 |
| 1.3 雷公藤萜类物质生物合成研究现状 | 第20-26页 |
| 1.3.1 雷公藤具有农用活性的次生代谢产物 | 第21-22页 |
| 1.3.2 萜类物质生物合成途径 | 第22-24页 |
| 1.3.3 萜类化合物合成途径的关键酶 | 第24-26页 |
| 1.4 论文选题依据和思路 | 第26-28页 |
| 第二章 材料和方法 | 第28-37页 |
| 2.1 供试材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第28页 |
| 2.1.2 供试试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第29页 |
| 2.1.4 引物合成与测序 | 第29-30页 |
| 2.2 研究方法和步骤 | 第30-37页 |
| 2.2.1 RNA的提取、精制和质量检测 | 第30页 |
| 2.2.2 cDNA双链的合成 | 第30-31页 |
| 2.2.3 cDNA双链的精制 | 第31-32页 |
| 2.2.4 DXR、HMGR基因的克隆 | 第32页 |
| 2.2.5 DXR、HMGR入门载体构建 | 第32-33页 |
| 2.2.6 DXR、HMGR表达载体构建 | 第33页 |
| 2.2.7 农杆菌感受态制备 | 第33-34页 |
| 2.2.8 TwDXR、TwHMGR转化农杆菌 | 第34页 |
| 2.2.9 愈伤组织的培养 | 第34页 |
| 2.2.10 雷公藤发状根基因表达水平检测方法 | 第34-35页 |
| 2.2.11 雷公藤发状根内酯醇、吉碱和次碱的含量测定方法 | 第35-37页 |
| 第三章 结果和分析 | 第37-50页 |
| 3.1 cDNA模板的获得 | 第37页 |
| 3.2 TwDXR和TwHMGR片段的克隆 | 第37-38页 |
| 3.3 构建过表达载体 | 第38-40页 |
| 3.3.1 入门载体的验证 | 第38-39页 |
| 3.3.2 表达载体的验证 | 第39-40页 |
| 3.4 转化农杆菌 | 第40-41页 |
| 3.5 愈伤组织的侵染 | 第41-42页 |
| 3.6 过表达发状根TwDXR和TwHMGR基因的相对表达量 | 第42-43页 |
| 3.7 过表达发状根三种萜类次生代谢物的含量测定 | 第43-50页 |
| 第四章 问题与讨论 | 第50-53页 |
| 4.1 TwDXR在雷公藤萜类物质合成途径的功能 | 第50-51页 |
| 4.2 TwHMGR在雷公藤萜类物质合成途径的功能 | 第51页 |
| 4.3 TwDXR和TwHMGR对雷公藤萜类物质合成的协同作用 | 第51-52页 |
| 4.4 对下游关键酶基因的进一步探索 | 第52-53页 |
| 第五章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
