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家蚕几种尿苷二磷酸—葡萄糖基转移酶的基因表达与功能研究

中文摘要第1-7页
Abstract第7-14页
第一章 文献综述第14-31页
 1 UGTs 与糖基化作用第14-22页
   ·UGTs 的概况第14-16页
   ·糖基化作用与底物类型第16-19页
   ·重组UGT 酶的体外表达第19-22页
 2 UGTs 与家蚕天然有色茧第22-31页
   ·家蚕有色茧中的主要色素物质第23-27页
   ·黄绿茧系茧色形成机理的探究第27-29页
   ·天然有色茧丝资源的特性及开发应用前景第29-31页
第二章 研究目的与内容第31-33页
 1 目的与意义第31页
 2 研究内容第31-32页
 3 技术路线图第32-33页
第三章 主要试剂与常用试验方法第33-45页
 1 常用材料与试剂第33-35页
   ·菌种、细胞系与蚕品种第33页
   ·分子生物学试剂第33页
   ·培养基第33页
   ·缓冲液和常用溶液第33-35页
   ·核酸电泳相关试剂第35页
   ·生物信息学资源及分析软件第35页
 2 主要仪器设备第35-36页
 3 常用实验方法第36-45页
   ·总RNA 的提取及cDNA 的制备第36-37页
   ·PCR 产物的回收第37页
   ·DNA 琼脂糖凝胶电泳第37-38页
   ·连接反应第38页
   ·感受态细胞制备第38页
   ·连接产物的转化第38页
   ·重组质粒的筛选第38页
   ·质粒的提取(抽裂解法)第38-39页
   ·实时定量PCR(Real time PCR)第39页
   ·细胞传代培养的基本操作第39-41页
   ·杆状病毒表达蛋白第41-43页
   ·BCA(bicinchoninicacid,二辛可酸)法侧定蛋白浓度第43页
   ·SDS-PAGE 电泳第43页
   ·Western blotting第43-45页
第四章 家蚕几种尿苷二磷酸-葡萄糖基转移酶基因的茧色品种差异表达第45-54页
 1 材料与方法第45-47页
   ·蚕品种第45-46页
   ·试验试剂与仪器第46页
   ·总RNA 提取第46页
   ·引物设计第46页
   ·竞争性RT-PCR检测第46-47页
 2 结果与分析第47-52页
   ·UGT 基因表达的组织特异性第47-49页
   ·UGT 基因的表达量差异第49-51页
   ·UGT30 在不同茧色品种的转录本差异第51-52页
 3 讨论第52-54页
第五章 家蚕几种UGT 基因的表达规律及功能研究第54-75页
 1 材料与方法第54-58页
   ·材料第54-55页
   ·实验方法第55-58页
 2 结果与分析第58-72页
   ·UGT30 的克隆、表达模式及功能研究第58-68页
   ·UGT86 和UGT89 的克隆及表达模式第68-72页
 3 讨论第72-75页
   ·茧色特异候选基因UGT30、UGT86 和UGT89 的克隆与时空表达调查第72-73页
   ·家蚕UGT30 的功能验证第73-75页
第六章 家蚕UGT 基因的真核表达和活性测定第75-85页
 1 材料与方法第75-77页
   ·实验材料第75页
   ·重组 UGT 的表达操作步骤第75-76页
   ·糖基化作用体外孵育方法第76页
   ·槲皮素的HPLC 分析条件第76-77页
 2 实验结果第77-82页
   ·UGT30 和UGT86 正确基因序列的克隆及测序第77页
   ·重组转座载体的构建和鉴定第77-78页
   ·重组杆状病毒粘粒(Bacmid)的获得和鉴定第78页
   ·重组杆状病毒感染 sf9 细胞第78-79页
   ·RT-PCR 鉴定转染的细胞在mRNA 分子水平上的转录情况第79-80页
   ·Western blotting 检测表达的目的蛋白第80-81页
   ·UGT30 和UGT86 重组蛋白的活性检测第81-82页
 3 讨论第82-85页
   ·杆状病毒表达系统可用于UGT 酶的活性检测第82-83页
   ·家蚕UGT 酶的底物活性及其生理作用第83-85页
第七章 综合结论第85-88页
 1 主要结论第85-86页
   ·家蚕中一些UGT 基因具有家蚕茧色品种间特异性第85页
   ·UGT30、UGT86 和UGT86 具有组织和发育时期特异性第85-86页
   ·UGT30 基因在家蚕生长发育期间发挥重要作用第86页
   ·家蚕UGT86 蛋白使槲皮素发生糖基化反应第86页
 2 进一步研究方向第86-88页
参考文献第88-96页
在学期间的论文及和学术成果第96页
攻读学位期间参与的科研项目第96-97页
附录第97-107页
致谢第107-108页

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