中文摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-14页 |
第一章 文献综述 | 第14-31页 |
1 UGTs 与糖基化作用 | 第14-22页 |
·UGTs 的概况 | 第14-16页 |
·糖基化作用与底物类型 | 第16-19页 |
·重组UGT 酶的体外表达 | 第19-22页 |
2 UGTs 与家蚕天然有色茧 | 第22-31页 |
·家蚕有色茧中的主要色素物质 | 第23-27页 |
·黄绿茧系茧色形成机理的探究 | 第27-29页 |
·天然有色茧丝资源的特性及开发应用前景 | 第29-31页 |
第二章 研究目的与内容 | 第31-33页 |
1 目的与意义 | 第31页 |
2 研究内容 | 第31-32页 |
3 技术路线图 | 第32-33页 |
第三章 主要试剂与常用试验方法 | 第33-45页 |
1 常用材料与试剂 | 第33-35页 |
·菌种、细胞系与蚕品种 | 第33页 |
·分子生物学试剂 | 第33页 |
·培养基 | 第33页 |
·缓冲液和常用溶液 | 第33-35页 |
·核酸电泳相关试剂 | 第35页 |
·生物信息学资源及分析软件 | 第35页 |
2 主要仪器设备 | 第35-36页 |
3 常用实验方法 | 第36-45页 |
·总RNA 的提取及cDNA 的制备 | 第36-37页 |
·PCR 产物的回收 | 第37页 |
·DNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第37-38页 |
·连接反应 | 第38页 |
·感受态细胞制备 | 第38页 |
·连接产物的转化 | 第38页 |
·重组质粒的筛选 | 第38页 |
·质粒的提取(抽裂解法) | 第38-39页 |
·实时定量PCR(Real time PCR) | 第39页 |
·细胞传代培养的基本操作 | 第39-41页 |
·杆状病毒表达蛋白 | 第41-43页 |
·BCA(bicinchoninicacid,二辛可酸)法侧定蛋白浓度 | 第43页 |
·SDS-PAGE 电泳 | 第43页 |
·Western blotting | 第43-45页 |
第四章 家蚕几种尿苷二磷酸-葡萄糖基转移酶基因的茧色品种差异表达 | 第45-54页 |
1 材料与方法 | 第45-47页 |
·蚕品种 | 第45-46页 |
·试验试剂与仪器 | 第46页 |
·总RNA 提取 | 第46页 |
·引物设计 | 第46页 |
·竞争性RT-PCR检测 | 第46-47页 |
2 结果与分析 | 第47-52页 |
·UGT 基因表达的组织特异性 | 第47-49页 |
·UGT 基因的表达量差异 | 第49-51页 |
·UGT30 在不同茧色品种的转录本差异 | 第51-52页 |
3 讨论 | 第52-54页 |
第五章 家蚕几种UGT 基因的表达规律及功能研究 | 第54-75页 |
1 材料与方法 | 第54-58页 |
·材料 | 第54-55页 |
·实验方法 | 第55-58页 |
2 结果与分析 | 第58-72页 |
·UGT30 的克隆、表达模式及功能研究 | 第58-68页 |
·UGT86 和UGT89 的克隆及表达模式 | 第68-72页 |
3 讨论 | 第72-75页 |
·茧色特异候选基因UGT30、UGT86 和UGT89 的克隆与时空表达调查 | 第72-73页 |
·家蚕UGT30 的功能验证 | 第73-75页 |
第六章 家蚕UGT 基因的真核表达和活性测定 | 第75-85页 |
1 材料与方法 | 第75-77页 |
·实验材料 | 第75页 |
·重组 UGT 的表达操作步骤 | 第75-76页 |
·糖基化作用体外孵育方法 | 第76页 |
·槲皮素的HPLC 分析条件 | 第76-77页 |
2 实验结果 | 第77-82页 |
·UGT30 和UGT86 正确基因序列的克隆及测序 | 第77页 |
·重组转座载体的构建和鉴定 | 第77-78页 |
·重组杆状病毒粘粒(Bacmid)的获得和鉴定 | 第78页 |
·重组杆状病毒感染 sf9 细胞 | 第78-79页 |
·RT-PCR 鉴定转染的细胞在mRNA 分子水平上的转录情况 | 第79-80页 |
·Western blotting 检测表达的目的蛋白 | 第80-81页 |
·UGT30 和UGT86 重组蛋白的活性检测 | 第81-82页 |
3 讨论 | 第82-85页 |
·杆状病毒表达系统可用于UGT 酶的活性检测 | 第82-83页 |
·家蚕UGT 酶的底物活性及其生理作用 | 第83-85页 |
第七章 综合结论 | 第85-88页 |
1 主要结论 | 第85-86页 |
·家蚕中一些UGT 基因具有家蚕茧色品种间特异性 | 第85页 |
·UGT30、UGT86 和UGT86 具有组织和发育时期特异性 | 第85-86页 |
·UGT30 基因在家蚕生长发育期间发挥重要作用 | 第86页 |
·家蚕UGT86 蛋白使槲皮素发生糖基化反应 | 第86页 |
2 进一步研究方向 | 第86-88页 |
参考文献 | 第88-96页 |
在学期间的论文及和学术成果 | 第96页 |
攻读学位期间参与的科研项目 | 第96-97页 |
附录 | 第97-107页 |
致谢 | 第107-108页 |