| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| 1.1 嗜盐菌 | 第11-14页 |
| 1.1.1 中度嗜盐菌 | 第12-13页 |
| 1.1.2 嗜盐四联球菌 | 第13-14页 |
| 1.2 细菌转录组学分析 | 第14-15页 |
| 1.3 膜蛋白 | 第15页 |
| 1.4 荧光定量PCR | 第15-17页 |
| 1.5 异源表达重组蛋白 | 第17-20页 |
| 1.5.1 亲和标签的应用 | 第17-18页 |
| 1.5.2 SDS-PAGE | 第18-19页 |
| 1.5.3 Western blotting | 第19-20页 |
| 1.6 本论文主要研究内容及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 TEH_05770 基因生物信息学分析及表达水平研究 | 第22-42页 |
| 2.1 菌株及药品试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.1 菌株、试剂盒及引物 | 第23-24页 |
| 2.1.2 RT-PCR用培养基以及相关用试剂配方 | 第24页 |
| 2.1.3 嗜盐四联球菌膜蛋白提取相关试剂配置 | 第24页 |
| 2.2 主要试剂及仪器 | 第24-26页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.3.1 嗜盐四联球菌提取CICC10469基因组提取 | 第26-27页 |
| 2.3.2 TEH_05770 基因扩增 | 第27页 |
| 2.3.3 TEH_05770 蛋白大小与功能预测及进化树构建 | 第27页 |
| 2.3.4 RT-PCR检测TEH_05770 基因表达量 | 第27-31页 |
| 2.3.5 嗜盐四联球菌膜蛋白提取 | 第31-32页 |
| 2.3.6 SDS-PAGE检测 | 第32-33页 |
| 2.4 结果 | 第33-40页 |
| 2.4.1 TEH_05770 基因PCR结果 | 第33-34页 |
| 2.4.2 TEH_05770 基因蛋白大小及进化树构建 | 第34-37页 |
| 2.4.3 荧光定量结果 | 第37-39页 |
| 2.4.4 嗜盐四联球菌膜蛋白提取结果 | 第39-40页 |
| 2.5 结果讨论及分析 | 第40-41页 |
| 2.5.1 嗜盐四联球菌TEH_05770 基因生物信息学分析 | 第40页 |
| 2.5.2 盐胁迫条件下TEH_05770 基因转录量变化 | 第40-41页 |
| 2.5.3 盐胁迫条件下细菌膜蛋白表达量变化 | 第41页 |
| 2.6 本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 TEH_05770 基因异源表达研究 | 第42-66页 |
| 3.1 实验材料及器材 | 第42-45页 |
| 3.1.1 实验菌种、质粒、试剂盒、引物 | 第42页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第42-43页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第43-44页 |
| 3.1.4 主要试剂配方 | 第44-45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-55页 |
| 3.2.1 PCR产物胶回收 | 第45-46页 |
| 3.2.2 扩增的TEH_05770 基因加A反应 | 第46页 |
| 3.2.3 DH5α 感受态制备 | 第46-47页 |
| 3.2.4 TEH_05770 基因TA克隆 | 第47-48页 |
| 3.2.5 携带TEH_05770 基因的pMD-18T载体的提取 | 第48页 |
| 3.2.6 pET32a-TEH_05770 载体构建 | 第48-50页 |
| 3.2.7 构建菌株耐盐性研究 | 第50-51页 |
| 3.2.8 重组蛋白的异源表达 | 第51-55页 |
| 3.3 实验结果 | 第55-63页 |
| 3.3.1 pET32a-TEH_05770 载体构建 | 第55-56页 |
| 3.3.2 重组菌在不同盐浓度条件下生长曲线的测定 | 第56-57页 |
| 3.3.3 重组菌中TEH_05770 基因在不同盐浓度条件下表达量 | 第57-58页 |
| 3.3.4 重组菌中TEH_05770 基因诱导表达条件选择 | 第58-59页 |
| 3.3.5 重组蛋白大量表达后纯化以及Western blot检测 | 第59-61页 |
| 3.3.6 重组蛋白纯化结果 | 第61-62页 |
| 3.3.7 低温诱导重组蛋白及纯化结果 | 第62页 |
| 3.3.8 不同盐浓度条件下重组蛋白表达结果 | 第62-63页 |
| 3.4 结果分析与讨论 | 第63-65页 |
| 3.4.1 外源基因TEH_05770 盐胁迫条件下转录结果 | 第63-64页 |
| 3.4.2 外源基因TEH_05770 异源表达 | 第64-65页 |
| 3.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 结论与展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 附件 | 第76页 |
