摘要 | 第3-4页 |
Abstract | 第4页 |
第一章 绪论 | 第8-16页 |
1.1 膀胱癌概述 | 第8页 |
1.2 糖生物学概述 | 第8-11页 |
1.2.1 糖生物学 | 第8-9页 |
1.2.2 糖链与糖蛋白 | 第9-10页 |
1.2.3 糖基转移酶 | 第10-11页 |
1.3 β1,4 半乳糖基转移酶 | 第11-13页 |
1.3.1 β1,4 半乳糖基转移酶家族 | 第11-12页 |
1.3.2 β1,4 半乳糖基转移酶 1 | 第12-13页 |
1.4 上皮间质转化 | 第13-14页 |
1.5 立题依据与意义 | 第14-15页 |
1.6 主要研究内容 | 第15-16页 |
第二章 材料与方法 | 第16-26页 |
2.1 实验材料 | 第16-20页 |
2.1.1 细胞株与质粒 | 第16页 |
2.1.2 培养基 | 第16-17页 |
2.1.3 主要试剂 | 第17-19页 |
2.1.4 主要仪器 | 第19-20页 |
2.2 实验方法 | 第20-26页 |
2.2.1 引物设计和目的基因的扩增 | 第20页 |
2.2.2 β4GalT1基因真核表达载体的构建 | 第20-21页 |
2.2.3 细胞培养 | 第21-22页 |
2.2.4 细胞稳定转染 | 第22页 |
2.2.5 实时荧光定量PCR | 第22页 |
2.2.6 蛋白提取 | 第22-23页 |
2.2.7 蛋白免疫印迹与凝集素印迹 | 第23页 |
2.2.8 凝集素印迹 | 第23页 |
2.2.9 细胞免疫荧光染色与细胞凝集素染色 | 第23-24页 |
2.2.10 细胞划痕实验 | 第24页 |
2.2.11 MTS检测细胞增殖 | 第24页 |
2.2.12 流式细胞检测 | 第24-25页 |
2.2.13 数据的统计学分析处理 | 第25-26页 |
第三章 结果与讨论 | 第26-45页 |
3.1 β1,4-半乳糖基转移酶1与膀胱癌发展的相关性研究 | 第26-30页 |
3.1.1 膀胱细胞中N-乙酰乳糖胺表达的检测 | 第26-27页 |
3.1.2 膀胱细胞中半乳糖基转移酶表达的检测 | 第27-28页 |
3.1.3 β4GalT1与膀胱癌相关性的检测 | 第28-30页 |
3.1.4 小结 | 第30页 |
3.2 上皮间质转化(EMT)对膀胱细胞的影响 | 第30-32页 |
3.2.1 TGF-β 处理后细胞形态的变化 | 第30页 |
3.2.2 TGF-β 处理后细胞内N-乙酰乳糖胺含量升高 | 第30-31页 |
3.2.3 TGF-β 处理后 β4GalT1表达量升高 | 第31-32页 |
3.2.4 小结 | 第32页 |
3.3 表达载体的构建及稳定转染细胞株的筛选 | 第32-36页 |
3.3.1 目的基因的扩增及表达载体的验证 | 第32-33页 |
3.3.2 过表达 β4GalT1稳定转染细胞株的筛选 | 第33-35页 |
3.3.3 干扰 β4GalT1稳定转染株的筛选 | 第35-36页 |
3.3.4 小结 | 第36页 |
3.4 长型和短型 β4GalT1细胞内定位的研究 | 第36-38页 |
3.4.1 小结 | 第38页 |
3.5 长型和短型 β4GalT1对细胞生物学功能的影响 | 第38-45页 |
3.5.1 长型和短型 β4GalT1对细胞迁移的影响 | 第38-39页 |
3.5.2 长型和短型 β4GalT1对细胞增殖的影响 | 第39-41页 |
3.5.3 长型和短型 β4GalT1对细胞周期的影响 | 第41-42页 |
3.5.4 长型和短型 β4GalT1对细胞凋亡的影响 | 第42-44页 |
3.5.5 小结 | 第44-45页 |
主要结论与展望 | 第45-47页 |
主要结论 | 第45页 |
展望 | 第45-47页 |
致谢 | 第47-48页 |
参考文献 | 第48-52页 |
附录一:附表 | 第52-54页 |
附录二:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |