小鼠睾丸3D培养体系的建立与成年小鼠精原干细胞富集方法的研究
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 睾丸 | 第12-16页 |
| 1.1.1 睾丸的形态结构与功能 | 第12-13页 |
| 1.1.2 精子发生过程 | 第13-14页 |
| 1.1.3 支持细胞 | 第14-15页 |
| 1.1.4 精子发生的调控 | 第15页 |
| 1.1.5 生殖细胞中的分子标记 | 第15-16页 |
| 1.2 细胞外基质 | 第16-21页 |
| 1.2.1 制备天然组织的ECM | 第16-19页 |
| 1.2.2 脱细胞后ECM的检测 | 第19页 |
| 1.2.3 ECM中残留化学试剂的清除 | 第19页 |
| 1.2.4 ECM作为生物支架的应用 | 第19-20页 |
| 1.2.5 ECM的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3 精原干细胞的培养 | 第21页 |
| 1.4 SSCs体外诱导精子发生 | 第21页 |
| 1.5 结语 | 第21-22页 |
| 第二章 制备小鼠睾丸支架 | 第22-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第22页 |
| 2.1.2 实验仪器耗材 | 第22页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 重要溶液的配制 | 第22-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 小鼠睾丸脱细胞 | 第24-25页 |
| 2.2.2 小鼠睾丸ECM组织学染色 | 第25-27页 |
| 2.2.3 小鼠睾丸ECM生化成分测定 | 第27-30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-46页 |
| 2.3.1 小鼠睾丸ECM的组织学染色结果 | 第30-35页 |
| 2.3.2 小鼠睾丸ECM生化成分测定结果 | 第35-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46页 |
| 2.5 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 新生小鼠睾丸细胞3D培养与鉴定 | 第47-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第47页 |
| 3.1.1 实验仪器及耗材 | 第47页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第47页 |
| 3.1.3 重要溶液配制 | 第47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-52页 |
| 3.2.1 制备睾丸支架 | 第47-48页 |
| 3.2.2 分离乳鼠睾丸细胞 | 第48页 |
| 3.2.3 向睾丸支架体注射乳鼠睾丸细胞 | 第48-49页 |
| 3.2.4 3D培养后的鉴定 | 第49-52页 |
| 3.3 实验结果 | 第52-56页 |
| 3.3.1 组织学染色结果 | 第52-53页 |
| 3.3.2 免疫组化染色结果 | 第53-54页 |
| 3.3.3 流式细胞术检测结果 | 第54-55页 |
| 3.3.4 RT-PCR基因表达检测结果 | 第55-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-57页 |
| 3.5 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 成年小鼠精原干细胞的分离纯化及培养 | 第58-73页 |
| 4.1 实验材料 | 第58-59页 |
| 4.1.1 实验仪器及耗材 | 第58页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第58页 |
| 4.1.3 重要溶液配制 | 第58-59页 |
| 4.2 实验方法 | 第59-65页 |
| 4.2.1 分离成年小鼠精原干细胞 | 第59-60页 |
| 4.2.2 精原干细胞的纯化 | 第60-62页 |
| 4.2.3 精原干细胞鉴定 | 第62-63页 |
| 4.2.4 成年小鼠精原干细胞纯化效率提高鉴定 | 第63-65页 |
| 4.3 实验结果 | 第65-71页 |
| 4.3.1 细胞培养结果 | 第65-66页 |
| 4.3.2 碱性磷酸酶染色结果 | 第66-67页 |
| 4.3.3 免疫荧光染色结果 | 第67-68页 |
| 4.3.4 流式细胞术检测结果 | 第68-70页 |
| 4.3.5 RT-PCR基因表达检测结果 | 第70-71页 |
| 4.4 讨论 | 第71-72页 |
| 4.5 小结 | 第72-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
