| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第13-29页 |
| 1.1 棉蚜抗药性研究现状 | 第13-16页 |
| 1.1.1 棉蚜对各类常规杀虫剂的抗性研究 | 第13-15页 |
| 1.1.2 吡虫啉等新烟碱类杀虫剂的抗药性研究 | 第15-16页 |
| 1.2 棉蚜对吡虫啉等杀虫剂的抗性机制 | 第16-19页 |
| 1.2.1 行为抗性机制 | 第16-17页 |
| 1.2.2 表皮穿透速率下降 | 第17页 |
| 1.2.3 代谢抗性 | 第17-19页 |
| 1.2.3.1 酯酶 | 第17-18页 |
| 1.2.3.2 多功能氧化酶 | 第18页 |
| 1.2.3.3 谷胱甘肽-S-转移酶 | 第18-19页 |
| 1.2.4 靶标抗性 | 第19页 |
| 1.3 昆虫烟碱型乙酰胆碱受体研究进展 | 第19-23页 |
| 1.3.1 乙酰胆碱受体的结构 | 第20-21页 |
| 1.3.2 脊椎动物烟碱型乙酰胆碱受体 | 第21页 |
| 1.3.3 昆虫烟碱型乙酰胆碱受体 | 第21-23页 |
| 1.4 免疫共沉淀研究进展 | 第23-24页 |
| 1.5 异源表达和电生理技术 | 第24-25页 |
| 1.5.1 非洲爪蟾表达系统 | 第24-25页 |
| 1.5.2 电生理技术 | 第25页 |
| 1.6 蛋白质结构预测 | 第25-27页 |
| 1.6.1 从头预测法 | 第26页 |
| 1.6.2 折叠识别法 | 第26页 |
| 1.6.3 同源建模法 | 第26-27页 |
| 1.7 分子对接 | 第27-28页 |
| 1.7.1 刚性对接 | 第27页 |
| 1.7.2 柔性对接 | 第27页 |
| 1.7.3 半柔性对接 | 第27-28页 |
| 1.8 研究的目的及意义 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-46页 |
| 2.1 供试试剂、药剂和主要仪器 | 第29-31页 |
| 2.1.1 主要化学试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.2 主要分子试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第31页 |
| 2.2 供试昆虫 | 第31-32页 |
| 2.3 免疫共沉淀 | 第32-34页 |
| 2.3.1 多克隆抗体制备 | 第32页 |
| 2.3.2 膜蛋白提取 | 第32-33页 |
| 2.3.3 免疫共沉淀 | 第33页 |
| 2.3.4 免疫印迹分析 | 第33-34页 |
| 2.4 棉蚜α3基因与载体的重组 | 第34-39页 |
| 2.4.1 总RNA提取 | 第34页 |
| 2.4.2 RNA纯度及浓度检测 | 第34-35页 |
| 2.4.3 RT-PCR | 第35页 |
| 2.4.4 引物设计 | 第35页 |
| 2.4.5 PCR扩增 | 第35-36页 |
| 2.4.6 PCR产物的纯化、克隆及测序 | 第36-39页 |
| 2.4.6.1 PCR产物的纯化 | 第36-37页 |
| 2.4.6.2 双酶切 | 第37页 |
| 2.4.6.3 酶切产物的纯化 | 第37页 |
| 2.4.6.4 载体连接 | 第37-38页 |
| 2.4.6.5 转化反应和扩大培养 | 第38页 |
| 2.4.6.6 质粒提取 | 第38页 |
| 2.4.6.7 质粒验证 | 第38-39页 |
| 2.5 大鼠β2基因与载体的重组 | 第39页 |
| 2.5.1 双酶切 | 第39页 |
| 2.5.2 酶切产物纯化 | 第39页 |
| 2.5.3 PCR扩增 | 第39页 |
| 2.6 大鼠β2~(R77)基因的质粒构建 | 第39-40页 |
| 2.7 异源表达及电生理 | 第40-43页 |
| 2.7.1 cRNA的合成 | 第41-42页 |
| 2.7.2 爪蟾卵母细胞的制备及cRNA注射 | 第42页 |
| 2.7.3 电生理检测 | 第42-43页 |
| 2.8 荧光定量PCR | 第43-44页 |
| 2.8.1 引物设计 | 第43-44页 |
| 2.8.2 荧光定量PCR扩增 | 第44页 |
| 2.9 同源建模与分子对接 | 第44-46页 |
| 2.9.1 棉蚜重组杂合nAChRs的3D模型的构建 | 第44-45页 |
| 2.9.2 棉蚜重组杂合nAChRs与吡虫啉的分子对接 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-60页 |
| 3.1 棉蚜nAChRs组合情况 | 第46-48页 |
| 3.2 目的基因与载体重组 | 第48-52页 |
| 3.2.1 棉蚜总RNA的提取及检测 | 第48-49页 |
| 3.2.2 目的基因的PCR扩增 | 第49-50页 |
| 3.2.3 目的基因与pT7TS表达载体的重组 | 第50-52页 |
| 3.3 电生理检测 | 第52-55页 |
| 3.4 荧光定量PCR | 第55-56页 |
| 3.5 棉蚜重组杂合nAChRs与吡虫啉的分子对接 | 第56-60页 |
| 4 讨论 | 第60-64页 |
| 4.1 棉蚜体内内源nAChRs组合情况 | 第60页 |
| 4.2 棉蚜nAChRs β1亚基81位点突变对受体功能和活性的影响 | 第60-62页 |
| 4.3 棉蚜nAChRs亚基mRNA表达量与抗性的关系 | 第62页 |
| 4.4 棉蚜重组杂合nAChRs与吡虫啉的分子对接 | 第62-64页 |
| 5 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第75页 |
