| 符号说明 | 第5-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第14-24页 |
| 1.1 钠氢离子交换蛋白（NHE）概述 | 第14-18页 |
| 1.1.1 NHE的简述述及分型 | 第14页 |
| 1.1.2 NHE1的结构 | 第14-15页 |
| 1.1.3 NHE1的功能与疾病 | 第15-17页 |
| 1.1.3.1 调节细胞内pH（pHi）值 | 第15页 |
| 1.1.3.2 稳定细胞容量 | 第15页 |
| 1.1.3.3 影响离子转运和组织损伤 | 第15-16页 |
| 1.1.3.4 影响细胞增殖或凋亡 | 第16页 |
| 1.1.3.5 调节细胞行为 | 第16页 |
| 1.1.3.6 NHE1与疾病 | 第16-17页 |
| 1.1.4 NHE1功能区 | 第17页 |
| 1.1.5 NHE1的研究展望 | 第17-18页 |
| 1.2 J亚群禽白血病病毒（ALV-J）概述 | 第18-22页 |
| 1.2.1 ALV-J的发现 | 第18-19页 |
| 1.2.2 ALV-J病毒结构 | 第19-20页 |
| 1.2.3 ALV-J的致病性及感染机制 | 第20-21页 |
| 1.2.4 ALV-J的防治 | 第21-22页 |
| 1.3 ALV-J及其受体NHE1研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 细胞、病毒和实验动物 | 第24页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 实验设备 | 第24-25页 |
| 2.1.4 试验地点 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-38页 |
| 2.2.1 chNHE1第一跨膜区（ECL1）基因克隆 | 第25-26页 |
| 2.2.1.1 引物设计与合成 | 第25页 |
| 2.2.1.2 目的基因的获取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 ECL1原核表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.2.1 DH5α感受态的细胞的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.2.2 连接产物的转化 | 第27页 |
| 2.2.2.3 重组质粒pGEX6p1ECL1的鉴定 | 第27页 |
| 2.2.3 ECL1基因的原核表达 | 第27-28页 |
| 2.2.4 ECL1原核表达蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.5 ECL1原核表达蛋白Western Blot验证 | 第29页 |
| 2.2.6 BCA蛋白定量法检测蛋白浓度 | 第29-30页 |
| 2.2.7 ECL1多克隆抗体的制备 | 第30页 |
| 2.2.8 ECL1多克隆抗体效价测定 | 第30-31页 |
| 2.2.9 Anti-ECL1抗体的细胞毒性检测 | 第31页 |
| 2.2.9.1 制作标准曲线（测定细胞具体数量） | 第31页 |
| 2.2.9.2 活力的计算 | 第31页 |
| 2.2.10 Anti-ECL1抗体体外阻断ALV-J感染的检测 | 第31-33页 |
| 2.2.10.1 细胞总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.10.2 RNA逆转录为cDNA | 第33页 |
| 2.2.11 Anti-ECL1抗体对ALV-J转录水平和抗原表达的影响 | 第33-35页 |
| 2.2.11.1 Real-time PCR检测ALV-J转录水平 | 第33-34页 |
| 2.2.11.2 ELISA检测Anti-ECL1抗体作用后的ALV-J p27抗原 | 第34-35页 |
| 2.2.12 Anti-ECL1抗体对ALV-J感染鸡组织保护能力检测 | 第35页 |
| 2.2.13 Anti-ECL1抗体对ALV-J感染鸡组织保护能力临床指标检测 | 第35页 |
| 2.2.13.1 生长情况和体重检测 | 第35页 |
| 2.2.13.2 血涂片镜检 | 第35页 |
| 2.2.14 实验组鸡各组织器官组织病理观察 | 第35-37页 |
| 2.2.15 免疫组化检测实验鸡chNHE1和ALV-J抗原的组织分布和定位 | 第37-38页 |
| 2.2.16 临床病例组织chNHE1的检测 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-58页 |
| 3.1 chNHE1 ECL1基因获取与分析 | 第38-41页 |
| 3.1.1 PCR获取ECL1基因 | 第38-39页 |
| 3.1.2 chNHE1 ECL1序列分析 | 第39-40页 |
| 3.1.3 ECL1原核表达载体构建 | 第40-41页 |
| 3.2 重组载体质粒的酶切鉴定 | 第41页 |
| 3.3 ECL1基因在大肠杆菌中诱导表达 | 第41-42页 |
| 3.4 ECL1重组蛋白纯化与Western Blot检测分析 | 第42-43页 |
| 3.4.1 ECL1重组蛋白的纯化 | 第42页 |
| 3.4.2 ECL1重组蛋白Western Blot检测 | 第42-43页 |
| 3.5 BCA法进行ECL1蛋白浓度测定 | 第43-44页 |
| 3.5.1 BCA蛋白定量法标准曲线的制备 | 第43页 |
| 3.5.2 原核表达ECL1蛋白浓度的测定 | 第43-44页 |
| 3.6 ECL1多克隆抗体效价的测定 | 第44页 |
| 3.7 Anti-ECL1抗体的细胞毒性检测 | 第44-45页 |
| 3.7.1 制定标准曲线（测定细胞具体数量） | 第44-45页 |
| 3.7.2 CCK-8 细胞毒性检测 | 第45页 |
| 3.8 Anti-ECL1抗体体外阻断ALV-J感染实验 | 第45-47页 |
| 3.8.1 荧光定量PCR检测ALV-J转录水平 | 第45-46页 |
| 3.8.2 ELISA检测Anti-ECL1抗体作用后ALV-J p27抗原 | 第46-47页 |
| 3.9 Anti-ECL1 抗体对 ALV-J 感染鸡组织保护能力检测 | 第47-52页 |
| 3.9.1 鸡群体重检测结果分析 | 第47-48页 |
| 3.9.2 血液形态学观察 | 第48-49页 |
| 3.9.3 实验鸡各组织器官组织学观察 | 第49-52页 |
| 3.10 荧光定量PCR检测实验鸡组织ALV-J转录水平 | 第52-54页 |
| 3.11 免疫组织化学检测实验鸡组织chNHE1和ALV-J的组织分布和定位 | 第54-56页 |
| 3.12 临床病例组织chNHE1的检测 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第72页 |
