| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-15页 |
| 1.1 烟草青枯病菌的发生状况 | 第11-13页 |
| 1.1.1 烟草青枯病的病原 | 第11页 |
| 1.1.2 烟草青枯病的浸染循环 | 第11-12页 |
| 1.1.3 烟草青枯病的发生 | 第12页 |
| 1.1.4 烟草青枯病的防治 | 第12-13页 |
| 1.2 烟草青枯病的检测方法 | 第13-14页 |
| 1.2.1 指示植物检测方法 | 第13页 |
| 1.2.2 平板涂布分离法 | 第13-14页 |
| 1.3 实时荧光定量PCR技术 | 第14页 |
| 1.3.1 实时荧光定量PCR技术原理 | 第14页 |
| 1.3.2 实时荧光定量PCR技术在病原体检测中应用 | 第14页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-22页 |
| 2.1 烟草植株根际微生物的分离和筛选 | 第15-16页 |
| 2.1.1 土样的采集 | 第15页 |
| 2.1.2 土壤微生物的分离和纯化 | 第15-16页 |
| 2.2 烟草青枯病菌荧光定量PCR检测体系的建立和优化 | 第16-19页 |
| 2.2.0 供试菌株 | 第16页 |
| 2.2.1 烟草青枯病菌荧光定量PCR检测引物的设计和合成 | 第16-17页 |
| 2.2.2 青枯病菌DNA的提取方法（CTAB/Na Cl法） | 第17-18页 |
| 2.2.3 烟草青枯病菌荧光定量PCR检测引物的特异性验证 | 第18页 |
| 2.2.4 烟草青枯病菌荧光定量PCR检测体系的建立及优化 | 第18-19页 |
| 2.2.5 引物灵敏度检测和标准曲线的绘制 | 第19页 |
| 2.3 土壤样品的采集与处理 | 第19-22页 |
| 2.3.1 样品的采集 | 第19-20页 |
| 2.3.2 土样和烟草样本总DNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.3.3 病害的调查 | 第21页 |
| 2.3.4 样品中青枯病菌的检测 | 第21页 |
| 2.3.5 气象资料的收集 | 第21-22页 |
| 3 结果与分析 | 第22-46页 |
| 3.1 烟草植株根际青枯菌的分离和筛选 | 第22页 |
| 3.2 引物特异性检测 | 第22-30页 |
| 3.2.1 常规PCR技术检测引物特异性 | 第22-24页 |
| 3.2.2 实时荧光定量技术检测引物特异性 | 第24-25页 |
| 3.2.3 优化的real-time PCR反应条件 | 第25-26页 |
| 3.2.4 引物灵敏度检测 | 第26-27页 |
| 3.2.5 标准曲线绘制 | 第27-28页 |
| 3.2.6 普通PCR和Real-time PCR结果对比 | 第28-30页 |
| 3.3 烟草青枯病的危害以及气象因子调查 | 第30-37页 |
| 3.4 土壤中烟草青枯病菌的Real-time PCR检测结果 | 第37-43页 |
| 3.5 烟草青枯病的危害度与土壤中病原菌的种群数量及气象因子的关系分析 | 第43-46页 |
| 3.5.1 气象条件与菌量、病情指数规律 | 第43-44页 |
| 3.5.2 数据的正态分布检验及Boxcox转换 | 第44-45页 |
| 3.5.3 土壤中的青枯病菌数量与气象因子的关系 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 4.1 土壤中DNA提取 | 第46页 |
| 4.2 实时荧光定量PCR技术的选择与优化 | 第46-47页 |
| 4.3 土壤中烟草青枯病菌的检测和动态分析 | 第47页 |
| 4.4 其他环境因素的影响 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51页 |
