| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 植物小RNA的研究进展 | 第11-21页 |
| 1.1.1 microRNA的研究进展 | 第11-15页 |
| 1.1.1.1 microRNA的发现及特性 | 第11-12页 |
| 1.1.1.2microRNA的生物合成 | 第12-13页 |
| 1.1.1.3 microRNA的作用机制 | 第13页 |
| 1.1.1.4 microRNA的生物学功能 | 第13-15页 |
| 1.1.2 siRNA（small interfering RNA） | 第15-18页 |
| 1.1.2.1 RNAi的发现 | 第16页 |
| 1.1.2.2 siRNA的作用机制 | 第16-17页 |
| 1.1.2.3 siRNA的生物学功能 | 第17-18页 |
| 1.1.3 tasiRNA | 第18-21页 |
| 1.1.3.1 tasiRNA的发现 | 第18-19页 |
| 1.1.3.2 tasiRNA的合成途径 | 第19-20页 |
| 1.1.3.3 tasiRNA的生物学功能 | 第20-21页 |
| 1.1.4 其他种类的小RNA | 第21页 |
| 1.2 植物小RNA在农业生产上的应用 | 第21-24页 |
| 1.2.1 miRNA的应用 | 第21-22页 |
| 1.2.2 RNAi的应用 | 第22页 |
| 1.2.3 tasiRNA的应用 | 第22-24页 |
| 第二章 实验方案与设计 | 第24-26页 |
| 2.1 实验目的与意义 | 第24页 |
| 2.2 实验内容 | 第24-25页 |
| 2.3 实验流程图 | 第25-26页 |
| 第三章 拟南芥内源小RNA随机过表达载体的构建 | 第26-34页 |
| 3.1 材料 | 第26-27页 |
| 3.1.1 菌种 | 第26页 |
| 3.1.2 试剂 | 第26-27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-31页 |
| 3.2.1 启动子Ubi的扩增 | 第27-28页 |
| 3.2.2 PCR产物的纯化与回收 | 第28页 |
| 3.2.3 大肠杆菌质粒的提取 | 第28页 |
| 3.2.4 pRDE重组质粒的构建 | 第28-29页 |
| 3.2.5 目的片段与载体的酶切及连接 | 第29-30页 |
| 3.2.6 CaCl2法制备DH5α 感受态细胞 | 第30页 |
| 3.2.7 连接产物的转化 | 第30页 |
| 3.2.8 重组质粒的PCR及双酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 3.3 实验结果 | 第31-33页 |
| 3.3.1 Ubi启动子PCR扩增结果 | 第31-32页 |
| 3.3.2 重组质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| 3.4 讨论 | 第33-34页 |
| 第四章 拟南芥内源小RNA随机过表达系统的验证 | 第34-44页 |
| 4.1 材料 | 第34页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 4.1.2 试剂 | 第34页 |
| 4.2 实验方法 | 第34-40页 |
| 4.2.1 拟南芥报告基因小RNA过表达载体构建 | 第34-35页 |
| 4.2.2 农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 4.2.3 农杆菌GV3101的转化 | 第36页 |
| 4.2.4 拟南芥花序转化法 | 第36页 |
| 4.2.5 转基因拟南芥的筛选鉴定 | 第36-37页 |
| 4.2.6 提取基因组DNA | 第37-38页 |
| 4.2.7 TRI法提取RNA | 第38-39页 |
| 4.2.8 MOPS电泳检测RNA完整性 | 第39页 |
| 4.2.9 反转录 | 第39-40页 |
| 4.3 结果与分析 | 第40-43页 |
| 4.3.1 构建含报告基因的三个载体结果 | 第40页 |
| 4.3.2 含报告基因转基因株系的验证 | 第40-41页 |
| 4.3.3 转基因株系的插入片段验证 | 第41-42页 |
| 4.3.4 转基因株系靶基因表达水平的测定 | 第42-43页 |
| 4.4 讨论 | 第43-44页 |
| 第五章 拟南芥内源小RNA文库的构建、深度测序和序列分析 | 第44-50页 |
| 5.1 材料 | 第44页 |
| 5.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 5.2.1 拟南芥内源小RNA文库的构建 | 第44-45页 |
| 5.2.2 拟南芥内源小RNA文库的深度测序 | 第45-46页 |
| 5.3 结果与分析 | 第46-49页 |
| 5.3.1 拟南芥内源小RNA建库结果 | 第46-47页 |
| 5.3.2 文库的深度测序结果 | 第47-49页 |
| 5.4 讨论 | 第49-50页 |
| 第六章 拟南芥内源小RNA随机过表达质粒文库的转化、转基因株系的筛选及插入片段鉴定 | 第50-54页 |
| 6.1 实验材料 | 第50页 |
| 6.2 实验方法 | 第50-51页 |
| 6.2.1 拟南芥内源小RNA随机过表达质粒文库的获得及转化 | 第50页 |
| 6.2.2 转基因株系的筛选及插入片段鉴定 | 第50-51页 |
| 6.3 结果 | 第51-53页 |
| 6.3.1 转基因株系筛选及插入片段的鉴定 | 第51-52页 |
| 6.3.2 随机挑斑测序结果 | 第52页 |
| 6.3.3 转基因植株筛选结果 | 第52-53页 |
| 6.4 讨论 | 第53-54页 |
| 第七章 讨论与结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
