| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-15页 |
| 第一章 胰高血糖素样肽-1的研究进展 | 第15-30页 |
| 前言 | 第15页 |
| 1. GLP-1概况 | 第15-23页 |
| ·GLP-1的来源 | 第15-18页 |
| ·GLP-1在体内的降解后的产物及功能 | 第18-19页 |
| ·GLP-1的生理功能 | 第19-23页 |
| 2 糖尿病的治疗 | 第23-28页 |
| ·目前已研发的糖尿病药物及临床应用面临的问题 | 第23-25页 |
| ·治疗糖尿病的给药方式 | 第25-28页 |
| 3. 本课题研究目的和意义 | 第28-30页 |
| 第二章 胰高血糖素样肽-1(1-37)的克隆、表达及分离纯化 | 第30-56页 |
| 前言 | 第30页 |
| 1. 材料 | 第30-32页 |
| ·质粒和菌种 | 第30-31页 |
| ·药品和试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器及设备 | 第31页 |
| ·分析软件 | 第31-32页 |
| 2. 方法 | 第32-44页 |
| ·GLP-1(1-37)在大肠杆菌DH5α中的克隆 | 第32-38页 |
| ·融合蛋白Trx-GLP-1(1-37)的诱导表达及可溶性鉴定 | 第38-41页 |
| ·融合蛋白Trx-GLP-1(7-37)的诱导表达 | 第41页 |
| ·融合蛋白Trx-GLP-1(1-37)的分离纯化 | 第41-43页 |
| ·蛋白GLP-1(1-37)的分离纯化 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白Trx-GLP-1(7-37)的分离纯化 | 第44页 |
| ·蛋白GLP-1(7-37)的分离纯化 | 第44页 |
| ·SDS-PAGE小分子胶检测蛋白 | 第44页 |
| 3. 结果 | 第44-54页 |
| ·GLP-1(1-37)在大肠杆菌DH5α中的克隆 | 第44-48页 |
| ·GLP-1(1-37)融合蛋白的表达及可溶性鉴定 | 第48-50页 |
| ·融合蛋白Trx-GLP-1(1-37)的分离纯化 | 第50-51页 |
| ·目的多肽GLP-1(1-37)的分离纯化 | 第51-53页 |
| ·GLP-1(7-37)的分离纯化 | 第53页 |
| ·小分子胶对蛋白的鉴定 | 第53-54页 |
| 4. 讨论与分析 | 第54-56页 |
| 第三章 GLP-1(1-37)性质的研究 | 第56-67页 |
| 前言 | 第56页 |
| 1. 材料 | 第56-57页 |
| ·试剂和药品 | 第56页 |
| ·主要仪器及设备 | 第56-57页 |
| ·实验动物 | 第57页 |
| ·分析软件 | 第57页 |
| 2. 方法 | 第57-60页 |
| ·GLP-1(1-37)的生物学活性研究 | 第57-58页 |
| ·体外GLP-1受体的激活实验 | 第58-59页 |
| ·GLP-1受体拮抗剂对GLP-1(1-37)活性的影响 | 第59页 |
| ·GLP-1(1-37)在血清中的稳定性分析 | 第59-60页 |
| 3 实验结果 | 第60-65页 |
| ·GLP-1(1-37)在动物体内的降血糖活性 | 第60-62页 |
| ·GLP-1受体激动剂 | 第62-63页 |
| ·Exendin(9-39)对GLP-1(1-37)降糖活性的影响 | 第63-64页 |
| ·GLP-1(1-37)与GLP-1(7-37)的稳定性比较 | 第64-65页 |
| 4 讨论与分析 | 第65-67页 |
| 第四章 tGLP-1串联体的克隆、表达 | 第67-77页 |
| 前言 | 第67页 |
| 1. 材料 | 第67-68页 |
| ·质粒和菌种 | 第67页 |
| ·药品和试剂 | 第67页 |
| ·主要仪器及设备 | 第67-68页 |
| ·分析软件 | 第68页 |
| 2. 方法 | 第68-70页 |
| ·GLP-1突变体的蹄选 | 第68页 |
| ·高效表达tGLP-1基因工程菌的构建 | 第68-69页 |
| ·tGLP-1衍生物融合蛋白的诱导表达与鉴定 | 第69页 |
| ·重组质粒的稳定性分析 | 第69-70页 |
| 3 结果 | 第70-75页 |
| ·GLP-1突变体活性比较 | 第70页 |
| ·tGLP-1串联重组体质粒的构建 | 第70-71页 |
| ·tGLP-1串联体融合蛋白的表达 | 第71-74页 |
| ·重组质粒的稳定性 | 第74-75页 |
| 4 讨论与分析 | 第75-77页 |
| 第五章 tGLP-1-C4融合蛋白的表达优化及分离纯化 | 第77-88页 |
| 前言 | 第77页 |
| 1 材料 | 第77-78页 |
| ·菌种 | 第77页 |
| ·药品和试剂 | 第77页 |
| ·主要仪器和设备 | 第77-78页 |
| ·分析软件 | 第78页 |
| 2. 方法 | 第78-80页 |
| ·活化菌种 | 第78页 |
| ·菌种生长曲线的绘制 | 第78页 |
| ·IPTG诱导表达优化 | 第78-79页 |
| ·tGLP-1-C4蛋白的分离纯化 | 第79-80页 |
| 3 结果 | 第80-86页 |
| ·菌种生长曲线的绘制 | 第80页 |
| ·装瓶量对IPTG诱导表达的影响 | 第80-81页 |
| ·诱导时间对IPTG诱导表达的影响 | 第81-82页 |
| ·诱导剂浓度对IPTG诱导表达的影响 | 第82-83页 |
| ·培养温度对IPTG诱导表达的影响 | 第83-84页 |
| ·优化前后蛋白表达比较 | 第84-85页 |
| ·tGLP-1-C4蛋白的纯化 | 第85-86页 |
| 4. 讨论与分析 | 第86-88页 |
| 第六章 几丁质-PGA包裹tGLP-1微粒的制备及性质研究 | 第88-98页 |
| 前言 | 第88页 |
| 1 材料 | 第88-89页 |
| ·试剂 | 第88-89页 |
| ·主要仪器及设备 | 第89页 |
| ·实验动物 | 第89页 |
| 2. 方法 | 第89-91页 |
| ·胰酶酶切包涵体 | 第89页 |
| ·包涵体被胰酶作用前后口服活性的比较 | 第89页 |
| ·包涵体tGLP-1-C4与天然GLP-1腹腔给药时的活性比较 | 第89-90页 |
| ·包涵体tGLP-1-C4与天然GLP-1口服给药时的活性比较 | 第90页 |
| ·Chitin-PGA包裹蛋白的微粒制备 | 第90页 |
| ·Chitin-PGA-tGLP-1-C4在体内的口服活性 | 第90页 |
| ·酪蛋白包裹Chitin-PGA-tGLP-1-C4在体内的活性 | 第90-91页 |
| 3. 结果 | 第91-96页 |
| ·胰酶切开包涵体 | 第91-92页 |
| ·tGLP-1-C4被胰酶作用前后的口服活性 | 第92页 |
| ·腹腔给药时tGLP-1-C4与天然GLP-1的活性比较 | 第92-93页 |
| ·口服给药时tGLP-1-C4与天然GLP-1的活性比较 | 第93页 |
| ·Chintin-PGA微粒形态 | 第93-94页 |
| ·蛋白微粒的制备及包裹率的分析 | 第94页 |
| ·Chitin-PGA包裹蛋白在体内的口服活性 | 第94-95页 |
| ·酪蛋白包裹Chitin-PGA的性质 | 第95-96页 |
| 4. 讨论与分析 | 第96-98页 |
| 附录 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
