| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 缩略词 | 第15-16页 |
| 第一篇 文献综述 | 第16-40页 |
| 第一章 大肠杆菌所致牛乳腺炎的先天免疫研究进展 | 第16-26页 |
| 1 牛的先天性免疫 | 第16-18页 |
| 1.1 中性粒细胞 | 第16-17页 |
| 1.2 病原体识别及TLR通路 | 第17-18页 |
| 2 大肠杆菌引起的乳腺炎 | 第18-21页 |
| 3 总结 | 第21页 |
| 参考文献 | 第21-26页 |
| 第二章 脂多糖结合蛋白(LBP)的研究进展 | 第26-40页 |
| 1 LBP的发现及初步认识 | 第26-27页 |
| 2 LBP的作用机制 | 第27-29页 |
| 3 LBP的生物学功能 | 第29-33页 |
| 3.1 LBP在感染和炎症反应中的作用 | 第29-31页 |
| 3.2 LBP基因多态性 | 第31-32页 |
| 3.3 LBP在乳腺及乳腺炎中的作用 | 第32-33页 |
| 4 总结 | 第33页 |
| 参考文献 | 第33-40页 |
| 第二篇 试验研究 | 第40-114页 |
| 第三章 LBP载体制备、重组蛋白表达与纯化 | 第40-52页 |
| 1 材料与方法 | 第40-43页 |
| 1.1 质粒、菌株和细胞 | 第40页 |
| 1.2 主要酶和试剂 | 第40-41页 |
| 1.3 主要仪器 | 第41页 |
| 1.4 主要配方 | 第41页 |
| 1.5 实验方法 | 第41-43页 |
| 2 结果 | 第43-48页 |
| 2.1 目的基因的扩增 | 第43页 |
| 2.2 载体的构建及重组载体的鉴定 | 第43-46页 |
| 2.3 目的蛋白的诱导表达 | 第46-47页 |
| 2.4 目的蛋白的分离、纯化和鉴定 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-49页 |
| 4 小结 | 第49页 |
| 参考文献 | 第49-52页 |
| 第四章 奶牛乳腺上皮细胞的优化培养及其炎症反应模型的建立 | 第52-68页 |
| 1 材料与方法 | 第52-58页 |
| 1.1 材料 | 第52页 |
| 1.2 试剂 | 第52页 |
| 1.3 仪器 | 第52-53页 |
| 1.4 实验方法 | 第53-57页 |
| 1.5 统计方法 | 第57-58页 |
| 2 结果 | 第58-63页 |
| 2.1 奶牛乳腺上皮细胞形态学观察 | 第58-59页 |
| 2.2 奶牛乳腺上皮细胞角蛋白-18免疫组化鉴定 | 第59-60页 |
| 2.3 奶牛乳腺上皮细胞western blot分析 | 第60页 |
| 2.4 LPS对奶牛乳腺上皮细胞细胞活力的影响 | 第60-61页 |
| 2.5 LPS对奶牛乳腺上皮细胞炎症相关因子基因表达的影响 | 第61-62页 |
| 2.6 LPS对奶牛乳腺上皮细胞炎症相关因子释放的影响 | 第62页 |
| 2.7 LPS对奶牛乳腺上皮细胞细胞凋亡的影响 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-64页 |
| 4 小结 | 第64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 第五章 LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症反应模型基因表达谱分析 | 第68-84页 |
| 1 材料与方法 | 第68-71页 |
| 1.1 材料 | 第68页 |
| 1.2 试剂 | 第68页 |
| 1.3 仪器 | 第68-69页 |
| 1.4 实验方法 | 第69-71页 |
| 1.5 统计方法 | 第71页 |
| 2 结果 | 第71-78页 |
| 2.1 总RNA提取质量控制 | 第71页 |
| 2.2 芯片杂交与扫描 | 第71-72页 |
| 2.3 表达谱芯片结果箱线图 | 第72页 |
| 2.4 基因芯片数据的预处理 | 第72-73页 |
| 2.5 表达谱芯片差异表达基因的筛选 | 第73页 |
| 2.6 差异表达基因的GO分析 | 第73-74页 |
| 2.7 差异表达基因的Pathway分析 | 第74页 |
| 2.8 筛选参与防御、免疫、炎症反应的45个差异表达基因 | 第74-76页 |
| 2.9 参与防御、免疫、炎症反应45个差异表达基因的Pathway分析 | 第76-77页 |
| 2.10 Q-PCR验证基因的表达水平相对定量分析 | 第77页 |
| 2.11 免疫印迹验证芯片结果 | 第77-78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| 4 小结 | 第80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 第六章 重组牛脂多糖结合蛋白(rbLBP)对脂多糖(LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症反应模型的影响 | 第84-100页 |
| 1 材料与方法 | 第84-87页 |
| 1.1 材料 | 第84页 |
| 1.2 试剂 | 第84页 |
| 1.3 仪器 | 第84页 |
| 1.4 实验方法 | 第84-86页 |
| 1.5 统计方法 | 第86-87页 |
| 2 结果 | 第87-94页 |
| 2.1 rbLBP对奶牛乳腺上皮细胞活力的影响 | 第87页 |
| 2.2 rbLBP对炎症反应模型乳腺上皮细胞活力的影响 | 第87-88页 |
| 2.3 rbLBP对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡的作用 | 第88-89页 |
| 2.4 rbLBP对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞TLR4、NF-κB、IL-1β和TNF-a基因表达水平的影响 | 第89-91页 |
| 2.5 rbLBP对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞IL-1β和TNF-a释放的影响 | 第91-92页 |
| 2.6 rbLBP对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞TLR4和p65蛋白表达的影响 | 第92-94页 |
| 2.7 共聚焦显微镜观测rbLBP对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞p65表达的影响 | 第94页 |
| 3 讨论 | 第94-95页 |
| 4 小结 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-100页 |
| 第七章 重组牛脂多糖结合蛋白(rbLBP)及重组牛点突变脂多糖结合蛋白(rbM-LBP)对脂多糖(LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症反应模型的影响 | 第100-114页 |
| 1 材料与方法 | 第100-102页 |
| 1.1 材料 | 第100页 |
| 1.2 试剂 | 第100页 |
| 1.3 仪器 | 第100页 |
| 1.4 实验方法 | 第100-102页 |
| 1.5 统计方法 | 第102页 |
| 2 结果 | 第102-110页 |
| 2.1 rbM-LBP对奶牛乳腺上皮细胞活力的影响 | 第102-103页 |
| 2.2 rbLBP、rbM-LBP对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞活力的影响 | 第103-104页 |
| 2.3 rbLBP、rbM-LBP对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡的作用 | 第104-105页 |
| 2.4 rbLBP、rbM-LBP对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞TLR4、NF-κB、IL-1β和TNF-a基因表达水平的影响 | 第105-107页 |
| 2.5 rbLBP、rbM-LBP对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞IL-1β和TNF-a释放的影响 | 第107-108页 |
| 2.6 rbLBP、rbM-LBP对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞TLR4和p65蛋白表达的影响 | 第108-110页 |
| 2.7 共聚焦显微镜观测rbLBP、rbM-LBP对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞p65表达的影响 | 第110页 |
| 3 讨论 | 第110-111页 |
| 4 小结 | 第111页 |
| 参考文献 | 第111-114页 |
| 结论和创新点 | 第114-116页 |
| 1 本研究的主要结论 | 第114页 |
| 2 本研究的创新点 | 第114-115页 |
| 3 有待解决的问题 | 第115-116页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
