| 致谢 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 英文缩略词表 | 第13-19页 |
| 引言 | 第19-21页 |
| 实验材料与仪器 | 第21-24页 |
| 1 实验材料 | 第21-24页 |
| 1.1 细胞株 | 第21页 |
| 1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.3 主要仪器 | 第22-24页 |
| 实验方法 | 第24-36页 |
| 1 细胞的培养 | 第24页 |
| 1.1 HL60、Jurkat、Karpas299细胞的培养 | 第24页 |
| 1.2 HEK-293T细胞的培养 | 第24页 |
| 2 核酸适配体的筛选 | 第24-29页 |
| 2.1 Protein-SELEX方法 | 第24-27页 |
| 2.1.1 ssDNA文库与CD33重组蛋白孵育与分离 | 第25页 |
| 2.1.2 ssDNA的纯化 | 第25页 |
| 2.1.3 PCR(Polymerase Chain Reaction)扩增 | 第25-26页 |
| 2.1.4 DNA的纯化 | 第26-27页 |
| 2.1.5 测量ssDNA的浓度 | 第27页 |
| 2.1.6 ssDNA的制备 | 第27页 |
| 2.2 快速高效Cell-SELEX方法 | 第27-29页 |
| 2.2.1 细胞株的准备 | 第27页 |
| 2.2.2 ssDNA文库的准备 | 第27页 |
| 2.2.3 阴性筛选(反筛) | 第27-28页 |
| 2.2.4 阳性筛选(正筛) | 第28页 |
| 2.2.5 PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.6 DNA纯化 | 第29页 |
| 2.2.7 测量ssDNA的浓度 | 第29页 |
| 2.2.8 ssDNA的制备 | 第29页 |
| 3 质粒提取并纯化 | 第29-30页 |
| 4 瞬时转染CD33 | 第30页 |
| 5 蛋白免疫印迹法检测相关蛋白表达 | 第30-33页 |
| 5.1 免疫印迹实验中部分试剂的配制 | 第30-31页 |
| 5.2 蛋白提取 | 第31页 |
| 5.3 蛋白浓度测定 | 第31-32页 |
| 5.4 蛋白免疫印迹法 | 第32-33页 |
| 6 激光共聚焦显微镜检测相关蛋白定位 | 第33-34页 |
| 7 流式细胞术 | 第34页 |
| 7.1 FITC表面标记检测核酸适配体的亲和性 | 第34页 |
| 7.2 Annexin V/PI双染检测细胞凋亡率 | 第34页 |
| 8 斑点杂交实验 | 第34页 |
| 9 MTT测定细胞存活率 | 第34-35页 |
| 10 数据统计 | 第35-36页 |
| 第一部分 D33靶向的核酸适配体筛选方法研究 | 第36-51页 |
| 1 实验结果 | 第36-50页 |
| 1.1 Western Blot及Confocal Microscopy检测CD33抗原的表达 | 第36-37页 |
| 1.2 Protein SELEX流程 | 第37-38页 |
| 1.3 Protein SELEX筛选进程评价 | 第38-39页 |
| 1.4 DNA配基高通量测序结果 | 第39-41页 |
| 1.5 核酸适配体A88与A97的亲和性检测 | 第41-42页 |
| 1.6 Cell-SELEX筛选流程 | 第42-43页 |
| 1.7 Western Blot及免疫荧光法检测CD33蛋白的过表达 | 第43-44页 |
| 1.8 Cell-SELEX筛选进程评价 | 第44-45页 |
| 1.9 核酸适配体S30与S28的亲和性分析 | 第45-46页 |
| 1.10 核酸适配体S30的结构与功能分析 | 第46-48页 |
| 1.11 核酸适配体的三级结构模拟 | 第48-50页 |
| 2 实验小结 | 第50-51页 |
| 第二部分 ox-Spdp-Aptamers偶联物的合成方法探讨 | 第51-61页 |
| 1 实验结果 | 第51-60页 |
| 1.1 Dox-Spdp-Aptamers偶联物合成路线 | 第51-53页 |
| 1.2 Dox-SPDP~Ⅰ的合成 | 第53-55页 |
| 1.3 Dox与Dox-SPDP~Ⅰ的抗肿瘤作用对比 | 第55-56页 |
| 1.4 Dox-SPDP~Ⅱ的合成 | 第56-58页 |
| 1.5 Dox与Dox-SPDP~Ⅱ的抗肿瘤作用对比 | 第58-60页 |
| 2 实验小结 | 第60-61页 |
| 第三部分 结果讨论 | 第61-65页 |
| 第四部分 论文创新点 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 综述 靴向CD33的核酸适配体偶联药物研究进展 | 第71-93页 |
| 1 细胞表面抗原CD33及其抗体偶联药物简介 | 第71-77页 |
| 1.1 CD33的分子概述 | 第72-74页 |
| 1.2 CD33分子的功能 | 第74-75页 |
| 1.3 抗CD33单克隆抗体偶联物研究进展 | 第75-77页 |
| 2 核酸适配体 | 第77-85页 |
| 2.1 核酸适配体的概述 | 第77-80页 |
| 2.2 核酸适配体的筛选方法 | 第80-82页 |
| 2.3 核酸适配体的应用 | 第82-85页 |
| 3 讨论与展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-93页 |
| 作者简历及在读期间所取得的科研成果 | 第93页 |
