| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第7-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 鸭疫里默氏杆菌研究概况 | 第12页 |
| 2 细菌铁摄取机制研究进展 | 第12-17页 |
| 2.1 三价铁离子转运系统 | 第13-16页 |
| 2.1.1 Siderophore | 第13-14页 |
| 2.1.2 Siderophore受体 | 第14页 |
| 2.1.3 TonB复合物 | 第14-15页 |
| 2.1.4 ABC转运体 | 第15页 |
| 2.1.5 铁离子的释放与储存 | 第15-16页 |
| 2.2 血红素转运系统 | 第16-17页 |
| 2.2.1 直接的血红素转运系统 | 第16页 |
| 2.2.2 血红素载体hemophore介导的血红素利用系统 | 第16-17页 |
| 3 细菌铁离子转运系统参与宿主致病研究进展 | 第17-18页 |
| 4 宿主针对细菌铁离子摄取的抗感染免疫 | 第18-19页 |
| 5 研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二部分 试验部分 | 第20-57页 |
| 第一章 鸭疫里默氏杆菌B739_1208基因缺失株的构建 | 第20-41页 |
| 1 试验材料 | 第20-22页 |
| 1.1 菌株 | 第20页 |
| 1.2 质粒 | 第20页 |
| 1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第20-21页 |
| 1.4.1 细菌培养基的配制 | 第20-21页 |
| 1.4.2 核酸电泳相关试剂的配制 | 第21页 |
| 1.4.3 其它相关试剂的配制 | 第21页 |
| 1.5 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2 试验方法 | 第22-31页 |
| 2.1 鸭疫里默氏杆菌B739_1208基因序列分析 | 第22页 |
| 2.2 引物的设计与合成 | 第22-23页 |
| 2.3 RA-CH-1 B739_1208基因缺失株构建相关基因的扩增 | 第23-24页 |
| 2.3.1 RA-CH-1 B739_1208基因左右同源臂的扩增 | 第23页 |
| 2.3.2 壮观霉素抗性盒片段SpcR的扩增 | 第23-24页 |
| 2.4 RA-CH-1 B739_1208基因同源臂与抗性片段的酶切与连接 | 第24-26页 |
| 2.5 重组质粒PEX 18GM-B739_1208 USD的构建 | 第26-29页 |
| 2.5.1 载体质粒的提取 | 第26页 |
| 2.5.2 重组B739_1208 USD基因片段与质粒的酶切与回收 | 第26-27页 |
| 2.5.3 连接 | 第27页 |
| 2.5.4 连接产物转化入E.coli XL1-Blue感受态细胞 | 第27页 |
| 2.5.5 阳性克隆的PCR鉴定 | 第27-28页 |
| 2.5.6 阳性克隆菌质粒的抽提、酶切鉴定与测序 | 第28-29页 |
| 2.5.7 重组自杀质粒转化入供体菌E.coli S17-1 | 第29页 |
| 2.6 RA-CH-1 B739_1208基因缺失株的构建、筛选与鉴定 | 第29-31页 |
| 2.6.1 细菌的活菌计数和抗生素敏感性检测 | 第29页 |
| 2.6.2 鸭疫里默氏杆菌RA-CH-1和大肠杆菌S17-1 pEX18Gm-B739_1208 USD的复苏与培养 | 第29-30页 |
| 2.6.3 接合转移 | 第30页 |
| 2.6.4 突变株的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.7 RA-CH-1 B739_1208基因缺失株与野生株生长曲线对比 | 第31页 |
| 3 试验结果 | 第31-39页 |
| 3.1 RA-CH-1 B739_1208基因序列比对结果 | 第31-32页 |
| 3.2 RA-CH-1 B739_1208基因左右同源臂的扩增与回收 | 第32-33页 |
| 3.3 壮观霉素抗性基因盒的扩增与回收 | 第33页 |
| 3.4 左右同源臂和壮观霉素抗性基因的连接 | 第33-34页 |
| 3.5 PEX1 8GM与B739_1208 USD重组片段的酶切 | 第34页 |
| 3.6 质粒与重组片段连接产物转化入XL1-BLUE感受态细胞 | 第34-35页 |
| 3.7 阳性克隆的菌落PCR鉴定 | 第35-36页 |
| 3.8 阳性克隆菌质粒的抽提与酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 3.9 测序鉴定结果 | 第37页 |
| 3.10 细菌的活菌计数与抗生素敏感性实验结果 | 第37页 |
| 3.11 突变株的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.12 野生株与突变株生长曲线的对比 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 5 结论 | 第40-41页 |
| 第二章 鸭疫里默氏杆菌B739-1208基因功能的初步鉴定 | 第41-51页 |
| 1 试验材料 | 第41页 |
| 1.1 菌株 | 第41页 |
| 1.2 质粒和动物 | 第41页 |
| 1.3 主要试剂 | 第41页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第41页 |
| 1.5 主要仪器设备 | 第41页 |
| 2 试验方法 | 第41-45页 |
| 2.1 RA-CH-1 B739_1208基因对铁离子利用的研究 | 第41-42页 |
| 2.2 RA-CH-1 B739_1208基因对血红蛋白利用情况的研究 | 第42页 |
| 2.3 荧光定量PCR检测RA-CH-1 B739_1208基因转录是否受FE~(3+)调控 | 第42-45页 |
| 2.3.1 荧光定量PCR模板cDNA的制备 | 第42-43页 |
| 2.3.2 荧光定量PCR引物的设计 | 第43页 |
| 2.3.3 荧光定量PCR标准曲线绘制所需模板的制备 | 第43-44页 |
| 2.3.4 荧光定量PCR标准曲线的绘制 | 第44-45页 |
| 2.3.5 荧光定量PCR检测cDNA样品 | 第45页 |
| 3 试验结果 | 第45-49页 |
| 3.1 RA-CH-1 B739_1208基因对铁离子的利用 | 第45-46页 |
| 3.2 RA-CH-1 B739_1208基因对血红蛋白的利用 | 第46-48页 |
| 3.3 标准曲线绘制所需模板pBAD24-B739_1208重组质粒的构建 | 第48页 |
| 3.4 荧光定量PCR引物检验与标准曲线绘制 | 第48-49页 |
| 3.5 RA-CH-1 B739_1208基因转录水平不受FE~(3+)调控 | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 第三章 鸭疫里默氏杆菌B739_1208基因缺失株的毒力评估 | 第51-57页 |
| 1 试验材料 | 第51页 |
| 1.1 菌株 | 第51页 |
| 1.2 实验动物 | 第51页 |
| 1.3 主要试剂和主要仪器 | 第51页 |
| 2 试验方法 | 第51-53页 |
| 2.1 野生株与突变株对雏鸭致死率的测定 | 第51页 |
| 2.2 野生株与突变株半数致死量(LD_(50))的测定 | 第51-52页 |
| 2.3 野生株与突变株在雏鸭体内竞争力的比较 | 第52页 |
| 2.4 野生株与突变株组织载量的测定 | 第52-53页 |
| 3 试验结果 | 第53-55页 |
| 3.1 野生株与突变株对雏鸭致死率的测定结果 | 第53页 |
| 3.2 野生株与突变株半数致死量测定结果 | 第53-54页 |
| 3.3 野生株与突变株在雏鸭体内竞争力的比较 | 第54-55页 |
| 3.4 野生株与突变株组织载量的测定 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
