| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 文中符号与缩略词 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 拟除虫菊酯类杀虫剂应用及其污染现状 | 第12-14页 |
| ·拟除虫菊酯类杀虫剂的应用 | 第12页 |
| ·拟除虫菊酯类杀虫剂对环境和人的危害 | 第12-14页 |
| ·拟除虫菊酯类杀虫剂的污染现状 | 第14页 |
| 2 拟除虫菊酯类农药的微生物降解酶制剂的研究进展 | 第14-18页 |
| ·降解拟除虫菊酯类农药的微生物种类 | 第14-15页 |
| ·微生物降解拟除虫菊酯类农药的机制 | 第15-16页 |
| ·微生物胞内酶的提取方法 | 第16-17页 |
| ·酶制剂存在的问题和发展方向 | 第17-18页 |
| 3 农药降解基因工程菌的研究进展 | 第18-22页 |
| ·基因工程菌的构建方法 | 第18-19页 |
| ·基因工程菌载体的构建 | 第19页 |
| ·同源重组及其种类 | 第19-20页 |
| ·构建基因工程菌过程中存在的问题 | 第20-21页 |
| ·转基因微生物及其安全性评测 | 第21-22页 |
| 4 农药污染的微生物修复 | 第22-24页 |
| 第二章 拟除虫菊酯类农药降解酶制剂的开发 | 第24-36页 |
| 1 实验材料与方法 | 第24-28页 |
| ·供试菌株与质粒 | 第24页 |
| ·菌株培养条件与试剂 | 第24-25页 |
| ·重组质粒pET24b-pytH在大肠杆菌中的诱导表达 | 第25页 |
| ·E.coli C43(DE3)菌体超声波破碎 | 第25页 |
| ·PytH蛋白的纯化 | 第25-26页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第26页 |
| ·PytH的水解圈实验 | 第26页 |
| ·粗酶液与纯酶液酶制剂对蔬菜上农药残余的降解 | 第26-27页 |
| ·温度对纯酶液酶制剂活力影响 | 第27-28页 |
| ·pH值对纯酶液酶制剂活力影响 | 第28页 |
| ·剂型和保藏时间对纯酶酶制剂活性的影响 | 第28页 |
| 2 结果和分析 | 第28-34页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第28-29页 |
| ·考马斯亮蓝测定蛋白含量 | 第29-30页 |
| ·粗酶和纯酶酶制剂的水解圈实验 | 第30页 |
| ·粗酶液酶制剂对蔬菜上农药残留的降解实验 | 第30-31页 |
| ·不同浓度的纯酶液酶制剂对蔬菜上农药残留的降解实验 | 第31-32页 |
| ·度对纯酶液酶制剂活力影响 | 第32-33页 |
| ·pH对纯酶液酶制剂活力影响 | 第33页 |
| ·剂型和保藏时间对纯酶酶制剂活性的影响 | 第33-34页 |
| 3 小结与讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 农药降解工程菌的构建 | 第36-50页 |
| 1 材料与方法 | 第36-42页 |
| ·菌株与质粒 | 第36页 |
| ·菌株培养条件与试剂 | 第36-37页 |
| ·引物 | 第37页 |
| ·同源重组载体的构建 | 第37-40页 |
| ·重组载体整合到P. putida KT2440染色体上 | 第40页 |
| ·不同的培养方式对同源重组效率的影响 | 第40-41页 |
| ·工程菌P.putida KT-pmca的水解圈实验 | 第41页 |
| ·紫外扫描检测工程菌P.putida KT-pmca对农药的降解效果 | 第41页 |
| ·高效液相色谱检测工程菌P.putida KT-pmca对四种农药的降解情况 | 第41页 |
| ·工程菌生长曲线的测定 | 第41-42页 |
| ·工程菌的遗传稳定性 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-48页 |
| ·DNA片段的克隆 | 第42页 |
| ·重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·两种培养方式对同源重组效率的影响 | 第43-44页 |
| ·降解基因的水解圈实验 | 第44-45页 |
| ·紫外扫描检测工程菌P.putida KT-pmca对农药的降解效果 | 第45-46页 |
| ·高效液相色谱检测工程菌P.putida KT-pmca对四种农药的降解情况 | 第46-48页 |
| ·工程菌生长曲线的测定 | 第48页 |
| ·工程菌的遗传稳定性 | 第48页 |
| 3 小结与讨论 | 第48-50页 |
| 全文总结 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 硕士论文创新点 | 第58-60页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第60-62页 |
| 附录一 文中所用的培养基与试剂配方 | 第62-64页 |
| 附录二 文中所涉及的基因序列 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
