| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩写词 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-20页 |
| 1 植物生物钟 | 第14-17页 |
| ·拟南芥的生物钟 | 第15-16页 |
| ·生物钟与开花调控 | 第16-17页 |
| 2 GI的研究进展 | 第17-18页 |
| 3 FKF1的研究进展 | 第18-19页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 龙眼DlGI和DlFKF1基因的克隆与表达分析 | 第20-33页 |
| 1 试验材料 | 第20-21页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| ·感受态细胞和克隆载体 | 第20页 |
| ·引物合成及测序 | 第20-21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| 2 试验方法 | 第21-23页 |
| ·总RNA的提取及纯化 | 第21页 |
| ·cDNA的合成 | 第21页 |
| ·引物设计与合成 | 第21-22页 |
| ·DlGI和DlFKF1基因片段的PCR扩增 | 第22页 |
| ·目的片段的回收 | 第22页 |
| ·载体与目的片段的连接 | 第22页 |
| ·产物的连接及转化 | 第22-23页 |
| ·测序及结果分析 | 第23页 |
| ·DlGI和DlFKF1基因的表达分析 | 第23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-31页 |
| ·‘红核子’龙眼RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·DlGI和DlFKF1基因的克隆 | 第24-30页 |
| ·龙眼DlGI和DlFKF1基因在花芽分化过程的表达 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 龙眼DlGI和DlFKF1基因植物表达载体构建及转化拟南芥 | 第33-52页 |
| 1 材料和仪器 | 第33-34页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞及载体 | 第33页 |
| ·试剂与试验仪器 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33页 |
| ·仪器设备 | 第33页 |
| ·培养基与培养条件 | 第33-34页 |
| 2 试验方法 | 第34-35页 |
| ·龙眼DlGI和DlFKF1(带有酶切位点)的克隆 | 第34页 |
| ·龙眼DlGI和DlFKF1基因表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·DlGI和DlFKF1与表达载体的连接 | 第35页 |
| ·DlGI和DlFKF1重组质粒转化大肠杆菌 | 第35页 |
| ·DlGI和DlFKF1重组质粒的验证 | 第35页 |
| 3 DlGI和DlFKF1重组质粒转化根癌农杆菌 | 第35-37页 |
| ·DlGI和DlFKF1重组质粒的提取 | 第35-36页 |
| ·根癌农杆菌GV3103的活化及感受态细胞制备 | 第36页 |
| ·DlGI和DlFKF1重组质粒转化GV3103 | 第36页 |
| ·DlGI和DlFKF1重组质粒转化GV3103验证 | 第36-37页 |
| 4 根癌农杆菌介导的DlGI和DlFKF1基因转化拟南芥 | 第37页 |
| ·拟南芥的播种 | 第37页 |
| ·拟南芥的遗传转化 | 第37页 |
| ·转基因拟南芥植株的筛选 | 第37页 |
| ·拟南芥的移栽 | 第37页 |
| 5 转基因拟南芥植株的分子鉴定 | 第37-39页 |
| ·转基因拟南芥植株DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·DNA鉴定 | 第38页 |
| ·转基因拟南芥植株RNA的提取 | 第38页 |
| ·半定量检测 | 第38页 |
| ·荧光定量PCR检测 | 第38-39页 |
| 6 转基因拟南芥植株表型的观测和统计 | 第39页 |
| 7 短日照下拟南芥转基因植株内源激素含量(GA_3、IAA)的测定 | 第39-40页 |
| ·拟南芥内源激素的提取 | 第39页 |
| ·拟南芥内源激素含量的测定 | 第39-40页 |
| 8 结果与分析 | 第40-50页 |
| ·DlGI和DlFKF1基因植物表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·pSAKDlGI和pSAKDlFKF1导入根癌农杆菌 | 第41-42页 |
| ·转基因拟南芥的筛选 | 第42-43页 |
| ·拟南芥转基因植株的分子鉴定 | 第43-44页 |
| ·T_3代转基因拟南芥性状观察 | 第44-50页 |
| ·长日照下转基因拟南芥表型变化 | 第44-47页 |
| ·根部表型差异 | 第44-45页 |
| ·开花时间表型差异 | 第45-46页 |
| ·拟南芥转基因植株根部IAA关键合成酶的表达分析 | 第46-47页 |
| ·短日照下转基因拟南芥表型变化 | 第47-50页 |
| ·根部表型差异 | 第47-48页 |
| ·开花时间表型差异 | 第48-49页 |
| ·拟南芥转基因植株根部GA_3关键合成酶的表达分析 | 第49-50页 |
| ·拟南芥转基因植株内源激素GA_3水平的测定 | 第50页 |
| 9 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 龙眼DlGI和DlFKF1基因转化烟草 | 第52-58页 |
| 1 材料和仪器 | 第52页 |
| ·植物材料 | 第52页 |
| ·DlGI和DlFKF1植物表达载体 | 第52页 |
| ·试剂与仪器设备 | 第52页 |
| ·培养基与培养条件 | 第52页 |
| ·培养基配方 | 第52页 |
| ·植物培养条件 | 第52页 |
| 2 根癌农杆菌介导的DlGI和DlFKF1基因转化普通烟草 | 第52-53页 |
| ·烟草的茎段培养及外植体预培养 | 第52-53页 |
| ·烟草外植体的转化 | 第53页 |
| ·侵染液的制备 | 第53页 |
| ·侵染 | 第53页 |
| ·烟草抗性芽的筛选 | 第53页 |
| ·抗性芽的生根培养 | 第53页 |
| ·抗性植株炼苗及移栽 | 第53页 |
| 3 烟草抗性植株的分子鉴定 | 第53-54页 |
| ·烟草抗性植株DNA的提取 | 第54页 |
| ·DNA鉴定 | 第54页 |
| ·转基因烟草植株主要植物学性状的观测 | 第54页 |
| 4 结果与分析 | 第54-57页 |
| ·根癌农杆菌介导的DlGI和DlFKF1基因转化普通烟草 | 第54页 |
| ·烟草转基因植株的分子鉴定 | 第54-55页 |
| ·转基因烟草性状观察 | 第55-57页 |
| ·转基因烟草的根部生长差异 | 第55-56页 |
| ·转基因烟草的开花情况 | 第56-57页 |
| 5 讨论 | 第57-58页 |
| 第五章 龙眼DlGI启动子的克隆 | 第58-68页 |
| 1 材料和仪器 | 第58页 |
| ·植物材料 | 第58页 |
| ·试剂 | 第58页 |
| ·感受态和克隆载体 | 第58页 |
| ·引物合成及测序 | 第58页 |
| ·仪器设备 | 第58页 |
| 2 试验方法 | 第58-61页 |
| ·‘红核子’和‘四季蜜’龙眼的DNA提取 | 第58-59页 |
| ·物设计与合成 | 第59页 |
| ·DlGI基因启动子克隆 | 第59-61页 |
| ·DlGI基因启动子全长验证 | 第61页 |
| ·目的片段的回收 | 第61页 |
| ·载体与目的片段的连接 | 第61页 |
| ·产物的连接及转化 | 第61页 |
| ·测序及结果分析 | 第61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-66页 |
| ·‘四季蜜’与‘红核子’龙眼DNA的提取 | 第62页 |
| ·DlGI启动子的克隆 | 第62-63页 |
| ·‘红核子’和‘四季蜜’龙眼DlGI启动子序列比较 | 第63-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 第六章 总结与展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
