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泛素连接酶HOIL-1L在线粒体自噬中的功能与机制研究

英文缩略词表第1-6页
摘要第6-9页
ABSTRACT第9-12页
前言第12-19页
材料与试剂第19-27页
 1 材料第19-20页
   ·菌株及质粒第19页
   ·主要试剂第19-20页
 2 方法第20-27页
   ·分子克隆第20-21页
   ·质粒提取第21-22页
   ·细胞培养第22页
   ·细胞传代第22页
   ·细胞复苏与冻存第22页
   ·细胞瞬时转染第22-23页
   ·细胞瞬时干涉第23页
   ·解偶联剂CCCP的处理第23页
   ·免疫荧光第23-24页
   ·细胞收样及蛋白定量(Bradford法)第24-25页
   ·Western Blot蛋白印迹第25页
   ·Annexin V FITC/PI凋亡试剂盒使用及流式细胞仪检测第25-26页
   ·免疫共沉淀第26页
   ·统计方法第26-27页
结果第27-40页
 一. 建立线粒体自噬模型及其检测体系第27-31页
  1. 泛素连接酶Parkin及HOIL 1L在各细胞系表达水平的检测第27-28页
  2. 解偶联剂CCCP诱导HeLa细胞发生线粒体损伤模型的建立第28页
  3. 在线粒体损伤模型中,验证已知调控分子Parkin的功能第28-30页
  4. 利用自噬标志物LC3 的特异变化,建立线粒体自噬检测评估体系第30页
  5. 本章小结第30-31页
 二. 泛素连接酶HOIL 1L介导Parkin非依赖线粒体自噬的发生第31-37页
  1. 检测RBR家族蛋白HOIL 1L、HOIP是否参与线粒体自噬过程第31-33页
  2. 建立稳定过表达mitoKeima的细胞线粒体自噬模型第33-35页
  3. 在稳定过表达mitoKeima细胞中验证HOIL 1L对线粒体自噬的功能第35-36页
  4. 对线粒体自噬体系中细胞凋亡影响的排除第36-37页
  5. 本章小结第37页
 三. 泛素连接酶HOIL 1L促进Parkin依赖线粒体自噬的发生第37-40页
  1. 敲低HOIL 1L抑制PINK1/Parkin途径的线粒体自噬第37-38页
  2. RBR家族蛋白HOIL 1L与Parkin相互作用鉴定第38-39页
  3. 本章小结第39-40页
讨论第40-42页
结论第42-43页
参考文献第43-47页
综述第47-54页
 参考文献第51-54页
附件第54-64页
个人简历第64-65页
致谢第65页

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