英文缩略词表 | 第1-6页 |
摘要 | 第6-9页 |
ABSTRACT | 第9-12页 |
前言 | 第12-19页 |
材料与试剂 | 第19-27页 |
1 材料 | 第19-20页 |
·菌株及质粒 | 第19页 |
·主要试剂 | 第19-20页 |
2 方法 | 第20-27页 |
·分子克隆 | 第20-21页 |
·质粒提取 | 第21-22页 |
·细胞培养 | 第22页 |
·细胞传代 | 第22页 |
·细胞复苏与冻存 | 第22页 |
·细胞瞬时转染 | 第22-23页 |
·细胞瞬时干涉 | 第23页 |
·解偶联剂CCCP的处理 | 第23页 |
·免疫荧光 | 第23-24页 |
·细胞收样及蛋白定量(Bradford法) | 第24-25页 |
·Western Blot蛋白印迹 | 第25页 |
·Annexin V FITC/PI凋亡试剂盒使用及流式细胞仪检测 | 第25-26页 |
·免疫共沉淀 | 第26页 |
·统计方法 | 第26-27页 |
结果 | 第27-40页 |
一. 建立线粒体自噬模型及其检测体系 | 第27-31页 |
1. 泛素连接酶Parkin及HOIL 1L在各细胞系表达水平的检测 | 第27-28页 |
2. 解偶联剂CCCP诱导HeLa细胞发生线粒体损伤模型的建立 | 第28页 |
3. 在线粒体损伤模型中,验证已知调控分子Parkin的功能 | 第28-30页 |
4. 利用自噬标志物LC3 的特异变化,建立线粒体自噬检测评估体系 | 第30页 |
5. 本章小结 | 第30-31页 |
二. 泛素连接酶HOIL 1L介导Parkin非依赖线粒体自噬的发生 | 第31-37页 |
1. 检测RBR家族蛋白HOIL 1L、HOIP是否参与线粒体自噬过程 | 第31-33页 |
2. 建立稳定过表达mitoKeima的细胞线粒体自噬模型 | 第33-35页 |
3. 在稳定过表达mitoKeima细胞中验证HOIL 1L对线粒体自噬的功能 | 第35-36页 |
4. 对线粒体自噬体系中细胞凋亡影响的排除 | 第36-37页 |
5. 本章小结 | 第37页 |
三. 泛素连接酶HOIL 1L促进Parkin依赖线粒体自噬的发生 | 第37-40页 |
1. 敲低HOIL 1L抑制PINK1/Parkin途径的线粒体自噬 | 第37-38页 |
2. RBR家族蛋白HOIL 1L与Parkin相互作用鉴定 | 第38-39页 |
3. 本章小结 | 第39-40页 |
讨论 | 第40-42页 |
结论 | 第42-43页 |
参考文献 | 第43-47页 |
综述 | 第47-54页 |
参考文献 | 第51-54页 |
附件 | 第54-64页 |
个人简历 | 第64-65页 |
致谢 | 第65页 |