| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 绪论 | 第9-14页 |
| ·引言 | 第9页 |
| ·刚毛柽柳概况 | 第9-10页 |
| ·过氧化物酶的研究概况 | 第10页 |
| ·硫氧还蛋白过氧化物酶基因的研究进展及功能 | 第10-11页 |
| ·功能 | 第10-11页 |
| ·酵母双杂交技术在植物当中的应用 | 第11-13页 |
| ·酵母双杂交系统的原理 | 第11-12页 |
| ·酵母双杂交系统在研究中的应用 | 第12-13页 |
| ·技术路线 | 第13-14页 |
| 2 柽柳2-Cys Prx基因的表达 | 第14-23页 |
| ·实验材料 | 第14-15页 |
| ·植物材料 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14页 |
| ·溶液配制 | 第14页 |
| ·LB培养基配制 | 第14-15页 |
| ·试验方法 | 第15-17页 |
| ·2-Cys Prx基因的序列分析 | 第15页 |
| ·2-Cys Prx基因的定量PCR | 第15-17页 |
| ·结果与分析 | 第17-21页 |
| ·柽柳2-Cys Prx基因的生物信息学分析 | 第17-20页 |
| ·柽柳2-Cys Prx基因在不同非生物胁迫下的表达模式 | 第20-21页 |
| ·讨论 | 第21-22页 |
| ·本章小结 | 第22-23页 |
| 3 柽柳2-Cys Prx基因的酵母转化及抗逆功能分析 | 第23-32页 |
| ·试验材料 | 第23-24页 |
| ·菌种与载体 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·试验方法 | 第24-27页 |
| ·酵母表达载体(pYES2-2-Cys Prx)的构建 | 第24-25页 |
| ·重组质粒(pYES2-2-Cys Prx)和空载体pYES2的酵母转化及鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组酵母INVScl(pYES2-2-Cys Prx)的逆境胁迫试验 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-30页 |
| ·酵母表达载体(pYES2-2-Cys Prx)的获得及重组子的获得 | 第27-29页 |
| ·重组酵母INVScl(pYES2-2-Cys Prx)抗逆性的提高 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| ·本章小结 | 第31-32页 |
| 4 柽柳2-Cys Prx基因的烟草转化及抗性分析 | 第32-43页 |
| ·试验材料 | 第32页 |
| ·菌株和载体 | 第32页 |
| ·主要化学试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·试验方法 | 第32-36页 |
| ·植物表达载体(pROKⅡ-2-Cys Prx)的构建 | 第32-34页 |
| ·农杆菌感受态的制备及电击转化 | 第34页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第34-35页 |
| ·转化烟草的PCR检测 | 第35页 |
| ·转基因烟草苗的抗性分析 | 第35-36页 |
| ·植物表达载体(pROKⅡ-2-Cys Prx)的获得 | 第36-37页 |
| ·菌液PCR检测 | 第36页 |
| ·阳性质粒测序鉴定 | 第36页 |
| ·重组质粒转化农杆菌的PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·转基因植株的获得以及PCR鉴定 | 第37-39页 |
| ·转基因植株的获得 | 第37-38页 |
| ·转基因植株的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·转基因烟草的抗性分析 | 第39-41页 |
| ·胁迫下转基因和非转基因株系的CAT活性比较 | 第39-40页 |
| ·转基因烟草的逆境胁迫 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 5 2-Cys Prx基因的互作蛋白研究 | 第43-56页 |
| ·试验材料 | 第43-44页 |
| ·菌株和载体 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| ·溶液配制 | 第44页 |
| ·试验方法 | 第44-49页 |
| ·酵母双杂交Bait表达载体(pGBKT7-2-Cys Prx)构建 | 第44-45页 |
| ·Bait蛋白的自激活及毒性检测 | 第45-46页 |
| ·Bait蛋白(pGBKT7-2-Cys Prx)筛选cDNA文库 | 第46-47页 |
| ·候选Prey质粒的分离与鉴定 | 第47-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-53页 |
| ·构建酵母双杂交Bait表达载体(pGBKT7-2-Cys Prx) | 第49页 |
| ·确定Bait蛋白无自激活及毒性 | 第49-50页 |
| ·筛选文库中与Bait(pGBKT7-2Cys-Prx)相互作用的蛋白 | 第50页 |
| ·阳性克隆检测 | 第50-51页 |
| ·Bait和Prey的进一步互作确认 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 附录 | 第65-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
