天山根瘤菌MsiR蛋白调控机理的研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| ·中慢生型天山根瘤菌概述 | 第9页 |
| ·MsiR的生理功能 | 第9-10页 |
| ·LysR家族转录调控蛋白 | 第10-14页 |
| ·LysR家族转录调控蛋白的典型结构 | 第10页 |
| ·LysR家族转录调控蛋白的调控模型 | 第10-11页 |
| ·LysR家族转录调控蛋白的应用前景 | 第11-14页 |
| ·转录调控因子的体外研究策略 | 第14-17页 |
| ·DNA与转录调控因子的相互作用与研究 | 第14-16页 |
| ·小分子配体与转录调控因子的相互作用与研究 | 第16-17页 |
| ·突变文库的构建策略 | 第17-18页 |
| ·易错PCR技术 | 第17-18页 |
| ·致突变菌株构建突变文库 | 第18页 |
| ·本课题研究目的意义及内容 | 第18-20页 |
| ·研究目的和意义 | 第18页 |
| ·研究内容 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-45页 |
| ·实验材料 | 第20-24页 |
| ·菌株 | 第20-21页 |
| ·质粒 | 第21-22页 |
| ·试剂 | 第22-23页 |
| ·酶与试剂盒 | 第23页 |
| ·实验仪器 | 第23-24页 |
| ·培养基及培养条件 | 第24页 |
| ·抗生素及其他常用试剂 | 第24页 |
| ·常用实验方法 | 第24-31页 |
| ·质粒抽提 | 第24-25页 |
| ·基因组的提取 | 第25页 |
| ·核酸回收 | 第25-27页 |
| ·转化与接合 | 第27-28页 |
| ·电泳 | 第28-29页 |
| ·酶反应体系 | 第29-30页 |
| ·信号检测 | 第30-31页 |
| ·MsiR生理活性的初步研究 | 第31-34页 |
| ·MsiR蛋白表达及纯化 | 第31-33页 |
| ·MsiR蛋白的生物活性 | 第33-34页 |
| ·MsiR蛋白的重要的调控位点 | 第34-41页 |
| ·引物序列 | 第34-37页 |
| ·MsiR结合DNA引起DNA弯曲角度的改变 | 第37页 |
| ·msiA基因的转录起始位点的确定 | 第37-38页 |
| ·msiA基因的启动子步移实验 | 第38-41页 |
| ·MsiR蛋白突变体的筛选 | 第41-45页 |
| ·丧失转录调控活性的MsiR蛋白突变体筛选 | 第41-43页 |
| ·37℃高可溶性的MsiR蛋白突变体筛选 | 第43-45页 |
| 3 结果与讨论 | 第45-67页 |
| ·MsiR蛋白的生物活性 | 第45-52页 |
| ·组氨酸对MsiR蛋白的生理活性的影响 | 第45-46页 |
| ·MsiR蛋白表达载体的构建及MsiR蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| ·MsiR与启动子区DNA的相互作用验证 | 第47-49页 |
| ·MsiR的寡聚化形态分析 | 第49-51页 |
| ·MsiR与小分子配体的相互作用的热力学参数 | 第51-52页 |
| ·MsiR蛋白的重要的调控位点 | 第52-58页 |
| ·MsiR结合DNA引起DNA弯曲角度的改变 | 第52-53页 |
| ·msiA基因的转录起始位点的确定 | 第53-54页 |
| ·msiA启动子区域的正向步移 | 第54-55页 |
| ·msiA启动子区域的反向步移 | 第55页 |
| ·MsiR蛋白与启动子DNA结合位点的确定 | 第55-57页 |
| ·MsiR蛋白的转录调控模型 | 第57-58页 |
| ·MsiR蛋白突变株的筛选 | 第58-67页 |
| ·突变文库的质量评价 | 第58-59页 |
| ·突变文库筛选的可行性分析及筛选条件 | 第59-61页 |
| ·不同类型的MsiR蛋白突变株 | 第61-67页 |
| 4 结论 | 第67-68页 |
| 5 展望 | 第68-69页 |
| 6 参考文献 | 第69-76页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第76-77页 |
| 8 致谢 | 第77页 |
