| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 缩略词 | 第9-10页 |
| 技术路线图 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-33页 |
| ·干细胞与重编程研究 | 第11-25页 |
| ·干细胞概念和分类 | 第11-12页 |
| ·干细胞研究历史 | 第12-13页 |
| ·干细胞机理研究 | 第13-16页 |
| ·干细胞多能性差异 | 第16页 |
| ·重编程方法研究 | 第16-18页 |
| ·诱导多能干细胞研究 | 第18-24页 |
| ·诱导多能干细胞分化及应用 | 第24-25页 |
| ·piggyBac转座子 | 第25-29页 |
| ·转座子的概念及分类 | 第25-26页 |
| ·piggyBac转座子 | 第26-28页 |
| ·piggyBac在哺乳动物中的应用 | 第28页 |
| ·piggyBac转座子在干细胞研究中的应用 | 第28-29页 |
| ·基因抓捕 | 第29-31页 |
| ·基因抓捕的概念 | 第29页 |
| ·基因抓捕的应用 | 第29-31页 |
| ·正向遗传学 | 第31-32页 |
| ·正向遗传学和反向遗传学概念 | 第31页 |
| ·正向遗传学应用 | 第31-32页 |
| ·研究目的和意义 | 第32-33页 |
| 第二章 材料和方法 | 第33-59页 |
| ·实验材料 | 第33-37页 |
| ·实验动物 | 第33页 |
| ·细胞系与菌株 | 第33页 |
| ·实验试剂 | 第33页 |
| ·分子实验试剂的配制 | 第33-34页 |
| ·细胞培养相关试剂 | 第34-35页 |
| ·细胞培养基的配置 | 第35-36页 |
| ·实验所用试剂盒 | 第36页 |
| ·引物 | 第36页 |
| ·主要仪器设备及耗材 | 第36-37页 |
| ·分析软件和网址 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-59页 |
| ·感受态细胞的制备及效价的测定 | 第37-38页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第38-39页 |
| ·细胞基因组DNA的提取 | 第39页 |
| ·胚胎成纤维细胞系的建立 | 第39-40页 |
| ·饲养层细胞的制备 | 第40-41页 |
| ·胚胎成纤维细胞的培养 | 第41-42页 |
| ·小鼠多能性干细胞的培养 | 第42-43页 |
| ·人多能性干细胞的培养 | 第43-44页 |
| ·多能性干细胞碱性磷酸酶检测 | 第44页 |
| ·反向PCR | 第44-46页 |
| ·二代测序Ion torrent | 第46-58页 |
| ·选热测序运行程序 | 第58-59页 |
| 第三章 结果与分析 | 第59-89页 |
| ·piggBac多能基因筛选体系确定 | 第59-65页 |
| ·载体构建 | 第59-60页 |
| ·利用抓捕载体pFindl结合KSM筛选重编程相关基因 | 第60-61页 |
| ·利用抓捕载体pFindl结合OKS筛选重编程相关基因 | 第61-63页 |
| ·OKS+pFindl单克隆扩繁与突变位点基因鉴定 | 第63-65页 |
| ·利用OKS+pFind1高通量筛选多能性相关基因 | 第65-77页 |
| ·突变克隆群体诱导与收集 | 第65页 |
| ·突变群体基因库获取 | 第65-67页 |
| ·突变基因建库与二代测序 | 第67页 |
| ·大规模测序数据分析 | 第67-71页 |
| ·绘制全基因组突变热点图谱 | 第71-73页 |
| ·绘制基因重编程相关度排名表 | 第73-75页 |
| ·Top1000基因GO分析 | 第75-76页 |
| ·Top1000基因进行KEGG通路分析 | 第76-77页 |
| ·IFN多能性验证 | 第77-89页 |
| ·人诱导多能性干细胞体系的建立 | 第77-81页 |
| ·人干扰素对人成纤维细胞重编程的作用(cell line CRL2097) | 第81-82页 |
| ·人干扰素对人成纤维细胞重编程的作用(cell line PCS201-10) | 第82-83页 |
| ·人干扰素IFN对重编程的剂量效应 | 第83-84页 |
| ·人干扰素IFN对小鼠成纤维细胞重编程作用 | 第84-85页 |
| ·小鼠干扰素对重编程的作用 | 第85页 |
| ·小鼠干扰素IFNα对重编程的剂量效应 | 第85-87页 |
| ·小鼠干扰素IFNγ对重编程的时间效应 | 第87-89页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第89-91页 |
| ·piggyBac基因抓捕系统的评价 | 第89页 |
| ·IFN对重编程的影响 | 第89-90页 |
| ·先天免疫通路与重编程相关性 | 第90页 |
| ·人iPSCs的诱导与鉴定 | 第90-91页 |
| 第五章 结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-99页 |
| 附录 | 第99-110页 |
| 附录1 引物设计 | 第99-102页 |
| 附录2 单染色体热点图 | 第102-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 个人简历 | 第111页 |
