| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-27页 |
| ·酿酒酵母细胞中钙离子信号传导途径网络 | 第8-17页 |
| ·酿酒酵母细胞中钙离子信号途径简介 | 第8-9页 |
| ·钙调磷酸酯酶 | 第9-11页 |
| ·酵母钙调磷酸酯酶在应答环境压力中的作用 | 第11-12页 |
| ·转录因子 Crz15777 | 第12-14页 |
| ·钙离子通道 | 第14-16页 |
| ·小结 | 第16-17页 |
| ·ESCRT 的功能和组成 | 第17-20页 |
| ·ESCRT 综述 | 第17页 |
| ·ESCRT 复合体的组成 | 第17-20页 |
| ·小结 | 第20页 |
| ·ESCRT 复合体与 Rim101 信号传导途径的关系 | 第20-26页 |
| ·Rim101 通路的概述 | 第20-21页 |
| ·ESCRT 复合体与 Rim101 信号传导途径的关系 | 第21-25页 |
| ·结论 | 第25-26页 |
| ·本论文的研究内容及意义 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-40页 |
| ·实验仪器与材料 | 第27-34页 |
| ·实验所用仪器 | 第27-28页 |
| ·主要实验试剂及试剂盒 | 第28-29页 |
| ·主要溶液及配制方法 | 第29-32页 |
| ·实验所用培养基 | 第32-34页 |
| ·所有实验的通用方法 | 第34-40页 |
| ·菌株传代与保存 | 第34页 |
| ·质粒或连接体系转化大肠杆菌感受态细胞 | 第34页 |
| ·碱裂解法快速提取质粒 DNA | 第34页 |
| ·PCR 反应体系的建立和产物纯化 | 第34-36页 |
| ·酶切反应体系的建立 | 第36页 |
| ·连接反应体系的建立 | 第36页 |
| ·酿酒酵母细胞的转化 | 第36-37页 |
| ·酿酒酵母细胞的基因组 DNA 的提取 | 第37-38页 |
| ·细胞中总蛋白的提取 | 第38页 |
| ·Western blot | 第38页 |
| ·倍比稀释法进行表型实验 | 第38页 |
| ·生物信息学方法 | 第38-40页 |
| 第三章 酿酒酵母钙离子敏感菌株的文库筛选 | 第40-61页 |
| ·实验材料 | 第40-42页 |
| ·实验菌株-缺失株文库 | 第40-41页 |
| ·实验中用到的引物 | 第41-42页 |
| ·本章实验方法 | 第42-43页 |
| ·实验所涉及到的通用实验方法 | 第42页 |
| ·钙离子敏感菌株的文库筛选 | 第42-43页 |
| ·胞内钙离子含量测定 | 第43页 |
| ·实验结果 | 第43-58页 |
| ·Ca~(2+)敏感菌株的文库筛选结果 | 第43-48页 |
| ·Ca~(2+)敏感菌株的功能和定位分析 | 第48-49页 |
| ·CsA 对钙离子敏感菌株敏感性的抑制作用 | 第49-52页 |
| ·胞内钙离子含量测定 | 第52-56页 |
| ·MgCl_2对钙离子敏感菌株的抑制作用 | 第56-58页 |
| ·本章小结与讨论 | 第58-61页 |
| 第四章 Class E VPS 基因与钙离子信号转导的关系 | 第61-76页 |
| ·实验材料与方法 | 第61-65页 |
| ·实验所用菌株、质粒和引物 | 第61-63页 |
| ·实验所涉及到的通用实验方法 | 第63页 |
| ·酿酒酵母细胞质内钙离子含量的测定 | 第63页 |
| ·酿酒酵母双基因缺失株的构建策略 | 第63-64页 |
| ·酿酒酵母β-半乳糖苷酶活性的测定 | 第64-65页 |
| ·实验结果 | 第65-75页 |
| ·Class E VPS 基因的缺失导致胞内钙离子含量和细胞质内钙离子浓度提高 | 第65-66页 |
| ·CsA 抑制 ESCRT 缺失株对钙离子敏感性的作用机理研究 | 第66-71页 |
| ·PMR1 转录水平的降低导致 ESCRT 基因缺失株对钙离子敏感 | 第71-74页 |
| ·PMR1 的过表达可以抑制 ESCRT 缺失株对钙离子的敏感性 | 第74-75页 |
| ·本章小结 | 第75-76页 |
| 第五章 Nrg1 负调控 Pmr1 | 第76-92页 |
| ·实验材料和方法 | 第76-81页 |
| ·实验所用菌株、引物和质粒 | 第76-78页 |
| ·实验所涉及到的通用实验方法 | 第78页 |
| ·EMSA 实验原理和方法 | 第78-79页 |
| ·GST-Nrg1 融合蛋白的纯化 | 第79页 |
| ·染色质免疫共沉淀（ChIP）实验原理和方法 | 第79-81页 |
| ·实验结果 | 第81-90页 |
| ·ESCRT 缺失株中Rim101不能被正常剪切导致其对钙离子和锂离子敏感 | 第81-84页 |
| ·ESCRT 缺失株中 NRG1 表达量的升高导致 PMR1 表达量的降低 | 第84-85页 |
| ·Nrg1 通过 PMR1 启动子上的两个结合位点对其进行负调控 | 第85-88页 |
| ·Nrg1 可以与 PMR1 启动子序列体内、体外结合 | 第88-90页 |
| ·本章小结 | 第90-92页 |
| 第六章 Crz1 对 PMR1 正调控 | 第92-100页 |
| ·实验材料和方法 | 第92-94页 |
| ·实验所用菌株、引物和质粒 | 第92-93页 |
| ·实验所涉及到的通用实验方法 | 第93页 |
| ·GST-Crz1 的纯化 | 第93-94页 |
| ·实验结果 | 第94-97页 |
| ·Crz1 与 PMR1 启动子结合位点的鉴定 | 第94-95页 |
| ·Crz1 通过 PMR1 启动子上两个保守序列对其正调控 | 第95-97页 |
| ·PMR1 在碱性应答条件下的表达 | 第97-98页 |
| ·PMR1，PMC1 和 7 个 ESCRT 复合物以及 NRG1 和 CRZ1 遗传学相互作用 | 第98-99页 |
| ·本章小结 | 第99-100页 |
| 第七章 全文总结与展望 | 第100-102页 |
| ·主要工作总结 | 第100页 |
| ·相关工作的展望 | 第100-102页 |
| 参考文献(References) | 第102-114页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
