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水稻BADH和SAMDC基因的遗传转化及其耐盐性研究

中文摘要第1-9页
英文摘要第9-11页
1. 文献综述第11-25页
 1.1 水稻遗传转化的研究进展第11-15页
  1.1.1 水稻遗传转化研究历史第11-13页
  1.1.2 水稻遗传转化的方法及其主要优缺点第13-15页
   1.1.2.1 基因枪轰击法第13-14页
   1.1.2.2 农杆菌介导转化法第14页
   1.1.2.3 PEG法第14页
   1.1.2.4 电激法第14-15页
   1.1.2.5 花粉管通道法第15页
  1.1.3 植物遗传转化的新策略第15页
 1.2 水稻耐盐转基因的研究进展第15-21页
  1.2.1 盐害及耐盐机理第16-17页
  1.2.2 耐盐基因及其在增强植物耐盐性的应用第17-19页
   1.2.2.1 糖醇类物质合成的相关基因第17页
   1.2.2.2 甜菜碱合成的相关基因第17页
   1.2.2.3 脯氨酸合成的相关基因第17-18页
   1.2.2.4 多胺物质合成的相关基因第18-19页
   1.2.2.5 Lea蛋白合成的相关基因第19页
  1.2.3 其它与渗透胁迫相关的功能性蛋白和调节蛋白第19-20页
  1.2.4 存在的问题与解决方法第20-21页
 1.3 植物甜菜合成基因工程研究进展第21-25页
  1.3.1 甜菜碱的生物学功能第21页
  1.3.2 甜菜碱的生物合成途径第21-22页
  1.3.3 基因工程在甜菜碱的生物合成上的第22-24页
   1.3.3.1 CMO/BADH途径的基因工程第22-23页
    1.3.3.1.1 胆碱单氧化物酶基因的应用第22页
    1.3.3.1.2 甜菜碱醛脱氢酶基因的应用第22-23页
   1.3.3.2 CDH/BADH途径的基因工程第23页
   1.3.3.3 胆碱氧化酶途径的基因工程第23-24页
  1.3.4 结束语第24-25页
2. 材料与方法第25-32页
 2.1 试验材料第25页
 2.2 农杆菌菌株及目的基因第25页
 2.3 主要生化试剂第25页
 2.4 组织培养及转化过程所用培养基第25-26页
 2.5 水稻愈伤组织的诱导和继代培养第26-27页
  2.5.1 水稻成熟胚培养第26页
  2.5.2 水稻幼胚培养第26-27页
  2.5.3 愈伤组织选择压的确定第27页
 2.6 农杆菌培养及水稻转化第27页
  2.6.1 农杆菌培养第27页
  2.6.2 水稻材料与农杆菌的共培养第27页
 2.7 基因枪法第27-28页
  2.7.1 金粉悬液的制备第27页
  2.7.2 DNA—金粉混合物的制备第27-28页
  2.7.3 基因枪法转化第28页
 2.8 抗性愈伤组织的筛选及植株再生第28页
  2.8.1 水稻转化效率的计算第28页
 2.9 转基因植株的分子鉴定第28-31页
  2.9.1 转基因植株总DNA提取第28-29页
  2.9.2 转基因植株的PCR分析第29-30页
  2.9.3 BADH基因的Southern-blot第30-31页
 2.10 转基因水稻材料的耐盐性鉴定第31页
  2.10.1 转基因植株当代的耐盐性鉴定第31页
  2.10.2 转基因种子耐盐性鉴定第31页
 2.11 转基因水稻BADH酶活性分析第31页
 2.12 转基因水稻植株后代遗传分析第31-32页
3. 结果与分析第32-51页
 3.1 水稻不同外植体的培养及愈伤组织的诱导第32页
 3.2 最适筛选剂及筛选浓度的确定第32-33页
  3.2.1 Kan、G418对水稻愈伤组织生长的抑制作用第32-33页
  3.2.2 潮霉素对水稻愈伤组织生长的抑制作用第33页
 3.3 抗性愈伤的筛选及植株的再生第33-38页
  3.3.1 转BADH基因水稻植株的获得第33-34页
  3.3.2 转SAMDC基因水稻植株的获得第34-38页
 3.4 转基因水稻PCR鉴定第38-40页
  3.4.1 转BADH基因水稻的PCR检测结果第38-39页
  3.4.2 转SAMDC基因水稻的PCR检测结果第39-40页
 3.5 转BADH基因水稻植株的Southern-blot分析第40-43页
 3.6 转基因水稻BADH酶活性测定第43-44页
 3.7 转BADH基因植株的耐盐性研究第44-47页
  3.7.1 T_0代转基因植株的耐盐性分析第44-45页
  3.7.2 转基因种子的耐盐性分析第45-47页
 3.8 转基因植株农艺性状及结实情况第47-50页
  3.8.1 转BADH基因水稻在温室中的生长情况第47-48页
  3.8.2 转化方法对转基因水稻育性的影响第48-50页
 3.9 转化基因植株后代的遗传状况分析第50-51页
  3.9.1 转基因T1代株系耐盐基因的分离第50-51页
4. 讨论第51-57页
 4.1 有关基因枪和农杆菌介导转化系统的几点看法第51-52页
  4.1.1 组织培养条件的优化第51页
  4.1.2 基因枪转化的操作参数第51页
  4.1.3 农杆菌介导转化效率的影响因素第51-52页
 4.2 NptⅡ、hpt基因作为选择标记基因的评价第52-53页
 4.3 T_0代转基因植株部分表型性状分析第53页
 4.4 转基因植株中外源基因的整合与表达第53-55页
  4.4.1 外源基因的整合情况第53-54页
  4.4.2 转基因水稻中外源基因的遗传第54-55页
  4.4.3 转基因植株中外源基因目标性状的出现第55页
 4.5 问题与展望第55-57页
5. 主要参考文献第57-63页

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