中文摘要 | 第1-9页 |
英文摘要 | 第9-11页 |
1. 文献综述 | 第11-25页 |
1.1 水稻遗传转化的研究进展 | 第11-15页 |
1.1.1 水稻遗传转化研究历史 | 第11-13页 |
1.1.2 水稻遗传转化的方法及其主要优缺点 | 第13-15页 |
1.1.2.1 基因枪轰击法 | 第13-14页 |
1.1.2.2 农杆菌介导转化法 | 第14页 |
1.1.2.3 PEG法 | 第14页 |
1.1.2.4 电激法 | 第14-15页 |
1.1.2.5 花粉管通道法 | 第15页 |
1.1.3 植物遗传转化的新策略 | 第15页 |
1.2 水稻耐盐转基因的研究进展 | 第15-21页 |
1.2.1 盐害及耐盐机理 | 第16-17页 |
1.2.2 耐盐基因及其在增强植物耐盐性的应用 | 第17-19页 |
1.2.2.1 糖醇类物质合成的相关基因 | 第17页 |
1.2.2.2 甜菜碱合成的相关基因 | 第17页 |
1.2.2.3 脯氨酸合成的相关基因 | 第17-18页 |
1.2.2.4 多胺物质合成的相关基因 | 第18-19页 |
1.2.2.5 Lea蛋白合成的相关基因 | 第19页 |
1.2.3 其它与渗透胁迫相关的功能性蛋白和调节蛋白 | 第19-20页 |
1.2.4 存在的问题与解决方法 | 第20-21页 |
1.3 植物甜菜合成基因工程研究进展 | 第21-25页 |
1.3.1 甜菜碱的生物学功能 | 第21页 |
1.3.2 甜菜碱的生物合成途径 | 第21-22页 |
1.3.3 基因工程在甜菜碱的生物合成上的 | 第22-24页 |
1.3.3.1 CMO/BADH途径的基因工程 | 第22-23页 |
1.3.3.1.1 胆碱单氧化物酶基因的应用 | 第22页 |
1.3.3.1.2 甜菜碱醛脱氢酶基因的应用 | 第22-23页 |
1.3.3.2 CDH/BADH途径的基因工程 | 第23页 |
1.3.3.3 胆碱氧化酶途径的基因工程 | 第23-24页 |
1.3.4 结束语 | 第24-25页 |
2. 材料与方法 | 第25-32页 |
2.1 试验材料 | 第25页 |
2.2 农杆菌菌株及目的基因 | 第25页 |
2.3 主要生化试剂 | 第25页 |
2.4 组织培养及转化过程所用培养基 | 第25-26页 |
2.5 水稻愈伤组织的诱导和继代培养 | 第26-27页 |
2.5.1 水稻成熟胚培养 | 第26页 |
2.5.2 水稻幼胚培养 | 第26-27页 |
2.5.3 愈伤组织选择压的确定 | 第27页 |
2.6 农杆菌培养及水稻转化 | 第27页 |
2.6.1 农杆菌培养 | 第27页 |
2.6.2 水稻材料与农杆菌的共培养 | 第27页 |
2.7 基因枪法 | 第27-28页 |
2.7.1 金粉悬液的制备 | 第27页 |
2.7.2 DNA—金粉混合物的制备 | 第27-28页 |
2.7.3 基因枪法转化 | 第28页 |
2.8 抗性愈伤组织的筛选及植株再生 | 第28页 |
2.8.1 水稻转化效率的计算 | 第28页 |
2.9 转基因植株的分子鉴定 | 第28-31页 |
2.9.1 转基因植株总DNA提取 | 第28-29页 |
2.9.2 转基因植株的PCR分析 | 第29-30页 |
2.9.3 BADH基因的Southern-blot | 第30-31页 |
2.10 转基因水稻材料的耐盐性鉴定 | 第31页 |
2.10.1 转基因植株当代的耐盐性鉴定 | 第31页 |
2.10.2 转基因种子耐盐性鉴定 | 第31页 |
2.11 转基因水稻BADH酶活性分析 | 第31页 |
2.12 转基因水稻植株后代遗传分析 | 第31-32页 |
3. 结果与分析 | 第32-51页 |
3.1 水稻不同外植体的培养及愈伤组织的诱导 | 第32页 |
3.2 最适筛选剂及筛选浓度的确定 | 第32-33页 |
3.2.1 Kan、G418对水稻愈伤组织生长的抑制作用 | 第32-33页 |
3.2.2 潮霉素对水稻愈伤组织生长的抑制作用 | 第33页 |
3.3 抗性愈伤的筛选及植株的再生 | 第33-38页 |
3.3.1 转BADH基因水稻植株的获得 | 第33-34页 |
3.3.2 转SAMDC基因水稻植株的获得 | 第34-38页 |
3.4 转基因水稻PCR鉴定 | 第38-40页 |
3.4.1 转BADH基因水稻的PCR检测结果 | 第38-39页 |
3.4.2 转SAMDC基因水稻的PCR检测结果 | 第39-40页 |
3.5 转BADH基因水稻植株的Southern-blot分析 | 第40-43页 |
3.6 转基因水稻BADH酶活性测定 | 第43-44页 |
3.7 转BADH基因植株的耐盐性研究 | 第44-47页 |
3.7.1 T_0代转基因植株的耐盐性分析 | 第44-45页 |
3.7.2 转基因种子的耐盐性分析 | 第45-47页 |
3.8 转基因植株农艺性状及结实情况 | 第47-50页 |
3.8.1 转BADH基因水稻在温室中的生长情况 | 第47-48页 |
3.8.2 转化方法对转基因水稻育性的影响 | 第48-50页 |
3.9 转化基因植株后代的遗传状况分析 | 第50-51页 |
3.9.1 转基因T1代株系耐盐基因的分离 | 第50-51页 |
4. 讨论 | 第51-57页 |
4.1 有关基因枪和农杆菌介导转化系统的几点看法 | 第51-52页 |
4.1.1 组织培养条件的优化 | 第51页 |
4.1.2 基因枪转化的操作参数 | 第51页 |
4.1.3 农杆菌介导转化效率的影响因素 | 第51-52页 |
4.2 NptⅡ、hpt基因作为选择标记基因的评价 | 第52-53页 |
4.3 T_0代转基因植株部分表型性状分析 | 第53页 |
4.4 转基因植株中外源基因的整合与表达 | 第53-55页 |
4.4.1 外源基因的整合情况 | 第53-54页 |
4.4.2 转基因水稻中外源基因的遗传 | 第54-55页 |
4.4.3 转基因植株中外源基因目标性状的出现 | 第55页 |
4.5 问题与展望 | 第55-57页 |
5. 主要参考文献 | 第57-63页 |