| 前言 | 第1-5页 |
| 中文摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 中英文缩略词表 | 第11-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-40页 |
| ·NK 细胞概述 | 第16-24页 |
| ·NK 细胞亚群 | 第16-19页 |
| ·NK 细胞受体 | 第19-21页 |
| ·NK 细胞杀伤靶细胞机制 | 第21-22页 |
| ·NK 细胞临床应用 | 第22-24页 |
| ·4-1BB 概述 | 第24-29页 |
| ·4-1BB 信号转导 | 第24-27页 |
| ·4-1BB 与 NK 细胞 | 第27-29页 |
| ·MICA 概述 | 第29-32页 |
| ·MICA 与 NKG2D | 第29-30页 |
| ·NKG2D 信号转导 | 第30-32页 |
| ·IL-21 概述 | 第32-35页 |
| ·IL-21 和 IL-21R | 第33页 |
| ·IL-21R 信号转导 | 第33-34页 |
| ·IL-21 在免疫学中的作用 | 第34-35页 |
| ·IL-21 与 NK 细胞 | 第35页 |
| ·立题依据 | 第35-37页 |
| ·主要技术路线 | 第37-38页 |
| ·表达质粒构建示意图 | 第38-40页 |
| 第2章 重组表达质粒的构建 | 第40-56页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·主要器材及设备 | 第40-41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·主要溶液配制 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-48页 |
| ·PBMCs 的分离 | 第41-42页 |
| ·Trizol 法提取总 RNA | 第42-43页 |
| ·RT-PCR 获取目的基因 | 第43-45页 |
| ·pcDNA3.1-Hygro-4-1BBL 和 pVITRO2-Neo-MICA 表达载体的构建 | 第45-48页 |
| ·结果 | 第48-54页 |
| ·4-1BBL 和 MICA CDS 的克隆 | 第48-50页 |
| ·质粒提取 | 第50页 |
| ·测序结果 | 第50-52页 |
| ·酶切位点的加入 | 第52-53页 |
| ·酶切 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第3章 基因工程重组 K562 细胞的构建、鉴定和纯化 | 第56-64页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·主要器材及设备 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·实验用质粒、细胞 | 第56页 |
| ·主要溶液配制 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-58页 |
| ·潮霉素、G418 最佳筛选浓度的确定 | 第57页 |
| ·脂质体法稳定转染 | 第57-58页 |
| ·流式细胞术鉴定抗性细胞目的蛋白表达率 | 第58页 |
| ·有限稀释法克隆 K562-4-1BBL 细胞 | 第58页 |
| ·流式细胞术鉴定阳性表达单克隆细胞 | 第58页 |
| ·多次有限稀释克隆出高表达、稳定遗传 K562-4-1BBL 细胞 | 第58页 |
| ·构建 K562-4-1BBL-MICA 细胞 | 第58页 |
| ·结果 | 第58-62页 |
| ·潮霉素、G418 最佳筛选浓度的确定 | 第58-60页 |
| ·转染后，经抗性筛选可见单克隆形成 | 第60页 |
| ·流式细胞术鉴定潮霉素抗性 K562 细胞 4-1BBL 表达率 | 第60-61页 |
| ·K562-4-1BBL-MICA 单克隆细胞株的鉴定 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第4章 K562 工程细胞体外扩增 PBMCs 中 NK 细胞 | 第64-78页 |
| ·实验材料 | 第64-65页 |
| ·主要器材及设备 | 第64页 |
| ·主要试剂 | 第64-65页 |
| ·实验用细胞 | 第65页 |
| ·主要溶液配制 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-67页 |
| ·健康志愿者 PBMCs 的分离 | 第65-66页 |
| ·MMC 灭活 K562-4-1BBL-MICA 细胞 | 第66页 |
| ·PBMCs 同 K562-4-1BBL-MICA+IL-21 细胞共培养 | 第66页 |
| ·NK、T 细胞同 K562-4-1BBL-MICA+IL-21 细胞共培养 | 第66页 |
| ·扩增前后 NK 细胞表面受体分析 | 第66-67页 |
| ·扩增前后 NK 细胞毒活性检测 | 第67页 |
| ·扩增前后 NK 细胞 IFN-γ分析 | 第67页 |
| ·结果 | 第67-75页 |
| ·PBMCs 中 NK 细胞在同 K562-4-1BBL-MICA 共培养之后的扩增 | 第67-69页 |
| ·扩增后 NK 细胞表面受体分析 | 第69-73页 |
| ·扩增前后 NK 细胞毒活性检测 | 第73-75页 |
| ·扩增前后 NK 细胞 IFN-γ分析 | 第75页 |
| ·讨论 | 第75-78页 |
| 第5章 CD56brightCD16+NK 细胞亚群分析 | 第78-84页 |
| ·实验材料 | 第78-79页 |
| ·主要器材及设备 | 第78页 |
| ·主要试剂 | 第78-79页 |
| ·实验细胞 | 第79页 |
| ·主要溶液配制 | 第79页 |
| ·实验方法 | 第79-80页 |
| ·健康志愿者 PBMCs 的分离 | 第79页 |
| ·MMC 灭活 K562-4-1BBL-MICA 细胞 | 第79-80页 |
| ·PBMCs 同 K562-4-1BBL-MICA+IL-21 细胞共培养 | 第80页 |
| ·扩增前后 PBMCs 中 NK 细胞亚群分析 | 第80页 |
| ·扩增前后 NK 细胞 IFN-γ和穿孔素表达分析 | 第80页 |
| ·CD56brightCD16+NK 细胞与 CD56dimCD16+NK 细胞毒活性检测 | 第80页 |
| ·结果 | 第80-82页 |
| ·扩增前后 PBMCs 中 NK 细胞亚群分析 | 第80-81页 |
| ·扩增前后 NK 细胞亚群 IFN-γ、穿孔素表达及细胞毒活性分析 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| 第6章 结论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-108页 |
| 作者简介及科研成果 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109页 |
