| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 主要符号表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-28页 |
| 1 研究的背景及意义 | 第13-14页 |
| 2 重金属污染的主要来源、危害及现状 | 第14-16页 |
| ·土壤中重金属的污染来源、危害及现状 | 第14-15页 |
| ·水体中重金属的污染来源、危害及现状 | 第15页 |
| ·农产品中重金属的污染来源、危害及现状 | 第15-16页 |
| 3 主要的重金属污染及危害 | 第16-18页 |
| ·铅 | 第16-17页 |
| ·汞 | 第17页 |
| ·铬 | 第17页 |
| ·砷 | 第17-18页 |
| ·镉 | 第18页 |
| 4 重金属的检测方法及特点 | 第18-22页 |
| ·传统检测法 | 第18-20页 |
| ·紫外可见分光光度法 | 第18-19页 |
| ·原子吸收光谱法 | 第19页 |
| ·原子荧光法 | 第19页 |
| ·电化学法 | 第19页 |
| ·X 荧光光谱法 | 第19-20页 |
| ·电感耦合等离子质谱法 | 第20页 |
| ·免疫检测法 | 第20-22页 |
| ·重金属 KinExA 免疫检测法 | 第21页 |
| ·重金属免疫色谱法 | 第21页 |
| ·免疫胶体金层析技术 | 第21-22页 |
| ·直接竞争性 ELISA 检测法 | 第22页 |
| ·间接竞争性 ELISA 检测法 | 第22页 |
| 5 国内外研究现状、发展水平以及存在的问题 | 第22-23页 |
| 6 本课题的研究目的、内容及意义 | 第23-24页 |
| 7 研究方法及技术路线 | 第24-28页 |
| ·研究方法 | 第24-27页 |
| ·技术路线 | 第27-28页 |
| 第二章 金属镉完全抗原的制备及鉴定 | 第28-37页 |
| 1 材料与方法 | 第28-30页 |
| ·仪器与试剂 | 第28-29页 |
| ·实验仪器 | 第28页 |
| ·实验试剂 | 第28-29页 |
| ·主要试剂配方 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-32页 |
| ·完全抗原的制备 | 第30-31页 |
| ·完全抗原的鉴定 | 第31-32页 |
| ·SDS-PAGE 鉴定 | 第31页 |
| ·抗原浓度测定 | 第31-32页 |
| ·紫外鉴定 | 第32页 |
| ·质谱鉴定 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-36页 |
| ·完全抗原 SDS-PAGE 鉴定 | 第32-33页 |
| ·抗原浓度测定 | 第33-35页 |
| ·BSA 标蛋白标准曲线绘制 | 第33页 |
| ·Cd-DTPA-BSA 浓度测定 | 第33-34页 |
| ·Cd-DTPA-OVA 浓度测定 | 第34页 |
| ·DTPA-BSA 浓度测定 | 第34-35页 |
| ·无金属抗原 DTPA-OVA 浓度测定 | 第35页 |
| ·紫外鉴定 | 第35-36页 |
| ·质谱鉴定 | 第36页 |
| 4 结论与讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 金属镉-纳米抗体库的筛选及检测 | 第37-48页 |
| 1 材料与方法 | 第37-40页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·细胞 | 第37页 |
| ·单域重链抗体库 | 第37页 |
| ·仪器与试剂 | 第37-38页 |
| ·实验仪器 | 第37-38页 |
| ·实验试剂 | 第38页 |
| ·主要试剂配方 | 第38-40页 |
| 2 实验方法 | 第40-44页 |
| ·原 VHH 抗体库的扩增 | 第41-42页 |
| ·M13K07 单克隆噬菌体的扩增、纯化 | 第41页 |
| ·原始 VHH 库的大量制备 | 第41-42页 |
| ·Cd-纳米抗体库的富集、筛选 | 第42-44页 |
| ·纳米抗体库第一轮富集步骤 | 第42-44页 |
| ·Cd-DTPA-VHH 的再富集 | 第44页 |
| 3 Cd-DTPA VHH 库富集度及特异性检测 | 第44-45页 |
| 4 结果与分析 | 第45-47页 |
| ·辅助噬菌体的扩增 | 第45页 |
| ·原始 VHH 库的扩增 | 第45页 |
| ·Cd-DTPA VHH 库富集度及特异性检测 | 第45-47页 |
| ·Cd-DTPA 第一至七轮纳米抗体库噬菌体输入输出量比较 | 第45-46页 |
| ·抗体库富集度及特异性检测 | 第46-47页 |
| 5 结论与讨论 | 第47-48页 |
| 第四章 单克隆 VHH 挑选及检测 | 第48-57页 |
| 1 材料与方法 | 第48-50页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·仪器与试剂 | 第48-49页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·实验试剂 | 第48-49页 |
| ·主要试剂配方 | 第49-50页 |
| 2 实验方法 | 第50-52页 |
| ·单克隆 VHH 菌落的挑选 | 第50-51页 |
| ·单克隆 VHH 上清 ELISA 检测 | 第51-52页 |
| ·单克隆阳性克隆初筛选 | 第51页 |
| ·阳性克隆特异性初步检测 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-56页 |
| ·单克隆阳性克隆初筛选 | 第52-54页 |
| ·阳性克隆特异性初检测 | 第54-56页 |
| 4 结论与讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 Cd-单克隆抗体(VHH)的特性测定及其应用 | 第57-70页 |
| 1 材料与方法 | 第57-60页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·仪器与试剂 | 第57-58页 |
| ·实验仪器 | 第57页 |
| ·实验试剂 | 第57-58页 |
| ·主要试剂配方 | 第58-60页 |
| 2 实验方法 | 第60-63页 |
| ·阳性单克隆抗体的扩增、纯化 | 第60页 |
| ·Cd-单克隆噬菌体 VHH-螯合物竞争性 ELISA | 第60-61页 |
| ·Cd-DTPA 单克隆 VHH 编码序列的测定 | 第61页 |
| ·Cd-DTPA-VHH 间接竞争性 ELISA 检测法的建立 | 第61-63页 |
| ·棋盘法最佳抗原抗体反应浓度摸索及其亲和常数 Kaff测定 | 第61-62页 |
| ·最佳浓度条件下对包被温度、时间及游离半抗原孵育时间优化 | 第62页 |
| ·VHH 与 DTPA 浓度关系摸索 | 第62页 |
| ·VHH 与 Cd-DTPA 及 DTPA 间接竞争性 ELISA | 第62页 |
| ·VHH 间接竞争性 ELISA 标准抑制曲线 | 第62-63页 |
| ·Cd-DTPA-VHH 与其他金属离子的交叉实验 | 第63页 |
| ·水样加强回收实验 | 第63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-69页 |
| ·阳性单克隆抗体的扩增、纯化 | 第63-64页 |
| ·Cd-单克隆噬菌体 VHH –螯合物竞争性 ELISA | 第64页 |
| ·Cd-DTPA 单克隆 VHH 编码序列的测定 | 第64-65页 |
| ·Cd-DTPA-VHH 间接竞争性 ELISA 检测法的建立 | 第65-68页 |
| ·棋盘法最佳抗原抗体反应浓度摸索及其亲和常数 Kaff测定 | 第65-66页 |
| ·最佳浓度条件下对包被温度、时间及游离半抗原孵育时间优化 | 第66页 |
| ·VHH 与 DTPA 浓度关系摸索 | 第66页 |
| ·VHH 与 Cd-DTPA 及 DTPA 间接竞争性 ELISA | 第66-67页 |
| ·VHH 间接竞争性 ELISA 标准抑制曲线 | 第67-68页 |
| ·Cd-DTPA-VHH 与其他金属离子的交叉实验 | 第68页 |
| ·水样加强回收实验 | 第68-69页 |
| 4 结论与讨论 | 第69-70页 |
| 第六章 结论与展望 | 第70-72页 |
| ·结论 | 第70页 |
| ·本课题创新点 | 第70-71页 |
| ·展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 攻读学位期间公开发表的论文和承担科研项目及取得成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
