| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-14页 |
| 1 鲤春病毒血症概况 | 第7-8页 |
| ·病原 | 第7-8页 |
| ·流行特点 | 第8页 |
| ·症状及病理变化 | 第8页 |
| 2 G 蛋白的研究进展 | 第8-12页 |
| ·结构与功能 | 第8-9页 |
| ·G 蛋白的体外表达 | 第9-10页 |
| ·G 蛋白在鲤春病毒血症预防上的应用 | 第10-12页 |
| ·用于鲤春病毒检测 | 第10-11页 |
| ·在构建 DNA 疫苗上的应用 | 第11-12页 |
| 3 单克隆抗体技术在水生生物病毒研究中的应用 | 第12-14页 |
| ·水生动物病毒的检测方法的建立 | 第12页 |
| ·在病毒变异分型及生物治疗上的作用 | 第12-13页 |
| ·在蛋白定位及功能分析上的应用 | 第13页 |
| ·疫苗研制中的应用 | 第13-14页 |
| 第二章 鲤春病毒血症病毒 G 蛋白的克隆、表达及纯化 | 第14-26页 |
| 1. 材料与方法 | 第14-18页 |
| ·材料 | 第14页 |
| ·方法 | 第14-18页 |
| ·SVCV 的增殖与鉴定 | 第14-15页 |
| ·G 基因的生物信息学分析及引物设计 | 第15页 |
| ·G 蛋白片段的扩增 | 第15-16页 |
| ·重组表达质粒的构建及表达 | 第16页 |
| ·包涵体的制备 | 第16-17页 |
| ·蛋白透析复性及纯度分析 | 第17页 |
| ·Western-Blot | 第17-18页 |
| 2 结果 | 第18-23页 |
| ·鲤春病毒的增殖与鉴定 | 第18页 |
| ·G 蛋白全长 cDNA 序列的克隆及生物信息学分析 | 第18-20页 |
| ·G 蛋白片段的扩增 | 第20页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第20-21页 |
| ·重组蛋白的表达及纯化 | 第21-23页 |
| 3 讨论 | 第23-26页 |
| ·SVCV 增殖与 G 基因的克隆 | 第23页 |
| ·鲤春病毒 G 蛋白高效表达的影响因素 | 第23-24页 |
| ·包涵体的处理与复性 | 第24-26页 |
| 第三章 抗 SVCV-G 蛋白单克隆抗体的制备 | 第26-34页 |
| 1. 材料与方法 | 第26-31页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-31页 |
| ·动物免疫 | 第26页 |
| ·筛选方法的建立 | 第26-28页 |
| ·间接 ELISA 方法的建立 | 第26-27页 |
| ·Dot-ELISA 方法的建立 | 第27页 |
| ·细胞爬片的间接免疫荧光实验 | 第27-28页 |
| ·细胞融合操作程序 | 第28-30页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第28页 |
| ·SP2/0 瘤细胞的制备 | 第28页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·细胞融合 | 第29页 |
| ·培养与观察 | 第29-30页 |
| ·融合细胞的检测 | 第30页 |
| ·有限稀释法的步骤 | 第30页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第30页 |
| ·杂交瘤细胞的复苏 | 第30-31页 |
| 2 结果 | 第31-32页 |
| ·单抗与复性蛋白的间接 ELISA 结果 | 第31页 |
| ·单抗与复性蛋白的间接 ELISA 结果 | 第31页 |
| ·单抗与复性蛋白的间接 IFA 结果 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-34页 |
| ·免疫程序的制定 | 第32页 |
| ·影响细胞融合的因素 | 第32页 |
| ·筛选方法的建立 | 第32-33页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的冻存及复苏 | 第33-34页 |
| 第四章 单克隆抗体的特性分析 | 第34-39页 |
| 1 材料与方法 | 第34-36页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·抗体的效价 | 第34页 |
| ·抗体亚型分析 | 第34-35页 |
| ·特异性分析 | 第35页 |
| ·稳定性 | 第35-36页 |
| 2 结果 | 第36-38页 |
| ·抗体效价测定 | 第36页 |
| ·抗体类型分析 | 第36-37页 |
| ·抗体特异性分析 | 第37页 |
| ·稳定性分析 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-39页 |
| 结语 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 附录 | 第45-49页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50页 |