| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-21页 |
| ·引言 | 第12-13页 |
| ·BT杀虫蛋白基因的研究进展 | 第13-17页 |
| ·Bt杀虫蛋白结构 | 第13页 |
| ·Bt杀虫蛋白的作用机制 | 第13-15页 |
| ·靶标害虫对Bt的抗性机制 | 第15-16页 |
| ·害虫抗性治理策略 | 第16-17页 |
| ·类钙粘蛋白的研究进展 | 第17-19页 |
| ·类钙粘蛋白的特征 | 第17-18页 |
| ·类钙粘蛋白与Bt杀虫蛋白抗性的关系 | 第18-19页 |
| ·类钙粘蛋白多肽片段对Bt杀虫蛋白作用的影响 | 第19页 |
| ·本研究的目的意义 | 第19-21页 |
| 第二章 二化螟类钙粘蛋白基因的时空表达分析 | 第21-30页 |
| ·材料与方法 | 第21-25页 |
| ·供试虫源 | 第21页 |
| ·试剂与仪器 | 第21页 |
| ·总RNA提取 | 第21-22页 |
| ·cDNA第一链的合成及验证 | 第22-23页 |
| ·荧光引物的设计及特异性检验 | 第23-24页 |
| ·类钙粘蛋白基因的表达谱分析 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-29页 |
| ·总RNA的提取与cDNA第一链的合成 | 第25页 |
| ·引物特异性检验 | 第25-27页 |
| ·CsCad表达谱分析 | 第27-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 二化螟中肠类钙粘蛋白基因的原核表达及结合特性分析 | 第30-43页 |
| ·材料与方法 | 第30-39页 |
| ·供试虫源 | 第30页 |
| ·试剂与仪器 | 第30-33页 |
| ·RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第33-34页 |
| ·引物设计及目的片段的扩增 | 第34页 |
| ·产物的回收 | 第34-35页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第37页 |
| ·目的蛋白的透析 | 第37-38页 |
| ·Ligand blot | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-41页 |
| ·类钙粘蛋白特征分析 | 第39页 |
| ·RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第39-40页 |
| ·目的片段的获得及表达载体的构建 | 第40页 |
| ·目的蛋白的诱导表达与纯化 | 第40页 |
| ·Ligand blot分析 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 二化螟类钙粘蛋白多肽片段对CRY毒素毒力作用的影响 | 第43-51页 |
| ·材料与方法 | 第43-45页 |
| ·供试虫源 | 第43页 |
| ·试剂与仪器 | 第43-44页 |
| ·二化螟CsCad基因多肽片段的表达 | 第44页 |
| ·二化螟CsCad基因原核表达可溶性蛋白的纯化 | 第44页 |
| ·二化螟CsCad基因原核表达包涵体蛋白的纯化 | 第44页 |
| ·纯化蛋白的定量 | 第44-45页 |
| ·生物测定 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-49页 |
| ·包涵体的纯化 | 第45-46页 |
| ·表达蛋白的定量 | 第46页 |
| ·重组蛋白对Cry1Ab毒素杀虫作用的影响 | 第46-48页 |
| ·重组蛋白对Cry1Ca毒素杀虫作用的影响 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第五章 二化螟类钙粘蛋白基因的抗体封闭研究 | 第51-59页 |
| ·材料与方法 | 第51-54页 |
| ·供试虫源 | 第51页 |
| ·试剂与仪器 | 第51-52页 |
| ·抗原的制备 | 第52页 |
| ·抗体的制备 | 第52页 |
| ·抗血清效价检测 | 第52-53页 |
| ·二化螟中肠BBMV的提取 | 第53页 |
| ·抗体特异性验证 | 第53页 |
| ·抗血清和抗体与BBMV的ELISA结合 | 第53页 |
| ·抗体封闭对二化螟初孵幼虫Cry1Ab和Cry1Ca敏感性的影响 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-57页 |
| ·抗血清效价测定 | 第54页 |
| ·抗体异性性检验 | 第54-55页 |
| ·抗血清和抗体与BBMV的结合 | 第55页 |
| ·抗体封闭后二化螟初孵幼虫对Cry1Ab和Cry1Ca敏感性的影响 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第六章 二化螟类钙粘蛋白基因的RNA干扰 | 第59-71页 |
| ·材料与方法 | 第59-63页 |
| ·供试虫源 | 第59页 |
| ·试剂与仪器 | 第59页 |
| ·技术路线 | 第59-60页 |
| ·RNAi干扰体系的建立 | 第60-61页 |
| ·RT-PCR和qPCR在基因水平检测干扰效率 | 第61-62页 |
| ·Western blot在蛋白水平上检测干扰效率 | 第62-63页 |
| ·生物测定在生物表型上检测干扰效率 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-70页 |
| ·RT-PCR检测干扰效率 | 第63-64页 |
| ·qPCR检测干扰效率 | 第64-65页 |
| ·Western blot检测干扰效率 | 第65页 |
| ·RNA干扰后二化螟对Cry1Ab和Cry1Ca毒素敏感性的影响 | 第65-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| 第七章 全文结论 | 第71-73页 |
| ·全文结论 | 第71页 |
| ·本文创新点 | 第71-72页 |
| ·展望 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 作者简历 | 第85页 |
