| 缩略词 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 目录 | 第12-17页 |
| 第一章 益生性乳杆菌及其Slps的概述 | 第17-33页 |
| 1 国内外动态 | 第17-31页 |
| ·乳杆菌的种类 | 第17-18页 |
| ·乳杆菌的益生性作用 | 第18-19页 |
| ·乳杆菌的黏附特征 | 第19-25页 |
| ·黏附素 | 第20-22页 |
| ·黏附靶受体 | 第22-24页 |
| ·乳杆菌Slps黏附宿主的影响因素 | 第24-25页 |
| ·乳杆菌的S-层蛋白(S1pS) | 第25-31页 |
| ·Slps的结构特点 | 第25-26页 |
| ·乳杆菌Slps的分离与提纯 | 第26-27页 |
| ·Slps及其编码基因的多样性 | 第27-29页 |
| ·Slps序列比对及其二级结构分析 | 第29页 |
| ·乳杆菌Slps的功能及应用 | 第29-31页 |
| 2 本文研究目的与意义 | 第31页 |
| 3 主要研究内容 | 第31-33页 |
| ·Slps乳杆菌菌株的筛选、鉴定及其相关生物学特性研究 | 第31-32页 |
| ·M8菌株Slps纯化、自组装超分子结构及免疫原性研究 | 第32页 |
| ·Slps编码基因克隆、序列分析及结构功能预测 | 第32-33页 |
| 第二章 Slps乳杆菌菌株的筛选及鉴定 | 第33-55页 |
| 1 材料与方法 | 第33-44页 |
| ·材料 | 第33-39页 |
| ·菌株 | 第33页 |
| ·样品 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·菌体形态显微观察试剂 | 第34-35页 |
| ·提取细菌基因组DNA相关试剂 | 第35-36页 |
| ·琼脂糖电泳相关试剂 | 第36-37页 |
| ·PCR相关试剂 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE相关试剂 | 第37-39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-44页 |
| ·样品处理及增菌培养 | 第39-40页 |
| ·乳杆菌的筛选与分离 | 第40-41页 |
| ·乳杆菌的纯化 | 第41页 |
| ·乳杆菌传代培养 | 第41页 |
| ·乳杆菌Slps电泳样品准备 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE分析菌株Slps的稳定性 | 第42页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第42-43页 |
| ·PCR扩增到16S rRNA序列 | 第43-44页 |
| ·测序及数据分析 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-52页 |
| ·含Slps的乳杆菌菌落及细胞形态特征 | 第44-46页 |
| ·SDS-PAGE检测各乳杆菌菌株Slps | 第46-47页 |
| ·菌株C7、M8产生Slps的稳定性分析 | 第47-48页 |
| ·16SrRNA序列分析法鉴定Slps乳杆菌菌株 | 第48-52页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第48页 |
| ·PCR扩增16S rRNA序列 | 第48-49页 |
| ·序列测定及分析 | 第49-50页 |
| ·系统发育树构建 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| ·Slps乳杆菌菌株的筛选及鉴定 | 第52页 |
| ·乳杆菌Slps的鉴定 | 第52-54页 |
| 4 小结 | 第54-55页 |
| 第三章 短乳杆菌M8菌株及其Sips的生物学特性分析 | 第55-67页 |
| 1 材料与方法 | 第55-59页 |
| ·材料 | 第55-57页 |
| ·菌株及细胞株 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55页 |
| ·相关试剂 | 第55-57页 |
| ·主要仪器设备 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-59页 |
| ·菌株及细胞培养 | 第57页 |
| ·对人工胃液、肠液的耐受能力 | 第57-58页 |
| ·Slps的可再生性检测 | 第58页 |
| ·体外黏附试验 | 第58-59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-65页 |
| ·耐消化酶能力 | 第59-60页 |
| ·Slps可再生特性结果 | 第60-62页 |
| ·体外黏附试验结果 | 第62-65页 |
| 3 讨论与小结 | 第65-67页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第四章 短乳杆菌M8菌株Slps的提纯及其氨基酸组成分析 | 第67-78页 |
| 1 材料与方法 | 第67-71页 |
| ·材料 | 第67-68页 |
| ·菌株及培养基 | 第67页 |
| ·相关试剂 | 第67-68页 |
| ·主要仪器设备 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-71页 |
| ·菌株培养 | 第68-69页 |
| ·Slps的提取 | 第69页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第69页 |
| ·Slps浓度测定 | 第69-70页 |
| ·Slps的浓缩及复溶 | 第70页 |
| ·Slps纯化 | 第70-71页 |
| ·纯化后的Slps纯度与浓度检测 | 第71页 |
| ·氨基酸组成分析 | 第71页 |
| 2 结果 | 第71-76页 |
| ·SDS-PAGE分析透析后的Slps | 第71-72页 |
| ·M8菌株Slps的纯化 | 第72-75页 |
| ·BSA标准曲线制作 | 第72-73页 |
| ·Slps浓度测定及浓缩 | 第73页 |
| ·Slps的纯化及纯度检测 | 第73-74页 |
| ·Slps浓度及纯化效率分析 | 第74-75页 |
| ·氨基酸组成分析 | 第75-76页 |
| 3 讨论与小结 | 第76-78页 |
| ·讨论 | 第76-77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| 第五章 M8菌株Slps分子的自组装结构与免疫原性初探 | 第78-93页 |
| 1 材料与方法 | 第78-83页 |
| ·材料 | 第78-79页 |
| ·菌株及培养基 | 第78页 |
| ·相关试剂 | 第78-79页 |
| ·主要仪器设备 | 第79页 |
| ·方法 | 第79-83页 |
| ·菌株培养 | 第79页 |
| ·M8菌株细胞AFM观察样品制备 | 第79页 |
| ·纯化Slps的AFM观察样品制备 | 第79-80页 |
| ·显微镜观察 | 第80页 |
| ·SDS-PAGE电泳分离Slps | 第80页 |
| ·切胶回收Slps | 第80-81页 |
| ·Sips多克隆抗体的制备 | 第81-82页 |
| ·Western blotting分析 | 第82-83页 |
| 2 结果与分析 | 第83-89页 |
| ·M8菌体细胞表面形貌展示 | 第83-84页 |
| ·离体后的Slps表面形貌展示 | 第84-86页 |
| ·TEM观测结果 | 第86-87页 |
| ·SDS-PAGE电泳及切胶回收 | 第87-88页 |
| ·Slps多抗制备ELISA法效价分析 | 第88页 |
| ·Slps兔抗IgG的纯化及其特异性检测 | 第88-89页 |
| 3 讨论与小结 | 第89-93页 |
| ·讨论 | 第89-91页 |
| ·Slps自组装超分子结构观测 | 第89-90页 |
| ·Slps免疫原性探讨 | 第90-91页 |
| ·小结 | 第91-93页 |
| ·Slps分子呈纳米尺度结构 | 第91-92页 |
| ·Slps免疫原性分析 | 第92-93页 |
| 第六章 M8菌株SlpM基因克隆与表达研究 | 第93-110页 |
| 1 材料与方法 | 第93-99页 |
| ·材料 | 第93-95页 |
| ·菌株和载体 | 第93-94页 |
| ·培养基 | 第94页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第94页 |
| ·主要仪器设备 | 第94-95页 |
| ·方法 | 第95-99页 |
| ·菌株培养 | 第95页 |
| ·菌株L.brevis M8基因组DNA提取 | 第95页 |
| ·引物确定 | 第95页 |
| ·PCR扩增及测序分析 | 第95-96页 |
| ·PCR扩增S-层基因ORF(slpM) | 第96页 |
| ·连接及转化 | 第96-97页 |
| ·转化 | 第97页 |
| ·PCR法鉴定阳性重组子 | 第97页 |
| ·重组质粒提取 | 第97页 |
| ·质粒双酶切 | 第97-98页 |
| ·片段回收 | 第98页 |
| ·原核表达载体pQE30-slpM的构建 | 第98-99页 |
| ·原核表达载体转化及双酶切验证 | 第99页 |
| ·提取重组质粒及转化 | 第99页 |
| ·诱导表达 | 第99页 |
| ·Slps电泳样品准备 | 第99页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第99页 |
| 2 结果与分析 | 第99-107页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第99-100页 |
| ·通用引物扩增Slps | 第100-101页 |
| ·slpMC序列Blastn比对分析 | 第101页 |
| ·slpMC序列Blastx比对分析 | 第101-102页 |
| ·slpM基因开放阅读框分析 | 第102-103页 |
| ·slpM基因的扩增 | 第103页 |
| ·slpM基因的克隆及阳性重组子验证 | 第103-104页 |
| ·双酶切目的片段 | 第104-105页 |
| ·双酶切pQE30质粒 | 第105页 |
| ·回收酶切产物 | 第105-106页 |
| ·pQE30-slpM载体构建 | 第106-107页 |
| ·诱导表达 | 第107页 |
| 3 讨论与小结 | 第107-110页 |
| ·讨论 | 第107-108页 |
| ·小结 | 第108-110页 |
| ·slpM基因的获得 | 第108-109页 |
| ·slpM基因的克隆与表达 | 第109-110页 |
| 第七章 M8菌株SlpM的生物信息学分析 | 第110-125页 |
| 1 软件及用途 | 第110页 |
| 2 结果与分析 | 第110-122页 |
| ·蛋白SlpM序列及其氨基酸组成分析 | 第110-113页 |
| ·SlpM分子量与等电点预测 | 第113页 |
| ·SlpM亲疏水性分析 | 第113-114页 |
| ·SlpM跨膜结构预测 | 第114-115页 |
| ·SlpM的信号肽序列分析 | 第115-116页 |
| ·SlpM与其他Slps进行多序列比对 | 第116-119页 |
| ·SlpM与源自其他L.brevis菌株的Slps的遗传进化分析 | 第119-120页 |
| ·比对序列的确定 | 第119页 |
| ·遗传进化树构建及分析 | 第119-120页 |
| ·SlpM的二级结构预测 | 第120-121页 |
| ·SlpM三级结构预测及其功能推导 | 第121-122页 |
| 3 讨论与小结 | 第122-125页 |
| ·讨论 | 第122-123页 |
| ·小结 | 第123-125页 |
| ·SlpM基本理化性质预测 | 第123页 |
| ·SlpM 二级结构预测 | 第123-124页 |
| ·SlpM三级结构预测 | 第124-125页 |
| 第八章 全文总结 | 第125-128页 |
| 1 主要研究成果 | 第125-126页 |
| ·Slps乳杆菌菌株的筛选及鉴定 | 第125页 |
| ·L.brevis M8及其Slps的生物学特性研究 | 第125页 |
| ·M8菌株Slps的提纯及氨基酸组成分析 | 第125-126页 |
| ·M8菌株Slps自组装结构初探 | 第126页 |
| ·slpM基因的克隆与表达 | 第126页 |
| ·SlpM蛋白结构及功能的预测 | 第126页 |
| 2 全文的创新点 | 第126-127页 |
| 3 展望 | 第127-128页 |
| 参考文献 | 第128-141页 |
| 附件 | 第141-148页 |
| 致谢 | 第148-149页 |
| 作者简介 | 第149页 |
