| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| ·细胞重编程的研究进展 | 第12-13页 |
| ·iPS的建立和研究进展 | 第13-14页 |
| ·Oct4/Sox2/Klf4/c-Myc/Nanog的作用 | 第14-15页 |
| ·iPS细胞的筛选与鉴定 | 第15-16页 |
| ·iPS细胞的筛选 | 第15-16页 |
| ·获得细胞的鉴定 | 第16页 |
| ·iPS的应用研究 | 第16-17页 |
| ·phiC31整合酶的研究进展 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的意义 | 第18-20页 |
| 第二章 C端带有HIV TAT穿膜肽的Oct4/Sox2/Klf4/c-Myc/Nanog五个重组蛋白的表达、纯化及检测 | 第20-43页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·构建表达载体所用材料及试剂 | 第20-21页 |
| ·蛋白表达及检测所用材料及试剂 | 第21页 |
| ·蛋白纯化所用材料及试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-33页 |
| ·pET-28a-Oct4-HIV-TAT、pET-28a-Sox2-HIV-TAT、pET-28a-Klf4-HIV-TAT、pET-28a-c-Myc-HIV-TAT、pET-28a-Nanog-HIV-TAT五个原核表达载体的构建 | 第22-32页 |
| ·目的蛋白的原核表达与检测 | 第32页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| ·结果分析 | 第33-40页 |
| ·pET-28a-Oct4-HIV-TAT、pET-28a-Sox2-HIV-TAT、pET-28a-Klf4-HIV-TAT、pET-28a-c-Myc-HIV-TAT、pET-28a-Nanog-HIV-TAT五个原核表达载体的构建 | 第33-36页 |
| ·Oct4-His/Sox2-His/Klf4-His/c-Myc-His/Nanog-His融合蛋白的表达及检测 | 第36-39页 |
| ·Oct4-HIV TAT-His/Sox2-HIV TAT-His/Klf4-HIV TAT-His/c-Myc-HIV TAT-His/Nanog-HIV TAT-His融合蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·结果讨论 | 第40-42页 |
| ·关于pET-28a-Oct4-HIV-TAT、pET-28a-Sox2-HIV-TAT、pET-28a-Klf4-HIV-TAT、pET-28a-c-Myc-HIV-TAT、pET-28a-Nanog-HIV-TAT原核表达载体的构建方面 | 第40-41页 |
| ·关于目的蛋白诱导表达方面 | 第41-42页 |
| ·关于目的蛋白纯化方面 | 第42页 |
| ·结论 | 第42-43页 |
| 第三章 牛胎儿成纤维细胞的P_(Oct4)-EGFP报告细胞系的构建 | 第43-66页 |
| ·材料 | 第43-45页 |
| ·构建载体所用材料与试剂 | 第43-44页 |
| ·构建细胞系所用材料与试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-57页 |
| ·牛皮肤成纤维细胞的培养 | 第45页 |
| ·iPS细胞特异性报告载体的构建 | 第45-56页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的P_(Oct4)-EGFP报告细胞系的构建 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-64页 |
| ·iPS细胞特异性报告载体的构建 | 第57-63页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的P_(Oct4)-EGFP报告细胞系的构建 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| ·iPS细胞特异性报告载体的构建 | 第64-65页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞的P_(Oct4)-EGFP报告细胞系的构建 | 第65页 |
| ·结论 | 第65-66页 |
| 第四章 牛iPS细胞的获得及鉴定 | 第66-71页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·诱导iPS细胞所用材料与试剂 | 第66页 |
| ·扩大培养并鉴定iPS细胞所用材料与试剂 | 第66-67页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-68页 |
| ·蛋白诱导产生牛的iPS细胞 | 第67-68页 |
| ·iPS细胞的扩大培养 | 第68页 |
| ·iPS细胞的初步鉴定 | 第68页 |
| ·结果 | 第68-69页 |
| ·重组蛋白诱导牛胎儿成纤维报告细胞产生iPS细胞 | 第68页 |
| ·iPS克隆的扩大培养 | 第68页 |
| ·iPS细胞的初步鉴定 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| ·重组蛋白诱导牛胎儿成纤维报告细胞产生iPS细胞 | 第69-70页 |
| ·iPS克隆的扩大培养 | 第70页 |
| ·iPS细胞的初步鉴定 | 第70页 |
| ·结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 附录 | 第76-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 个人简介 | 第85页 |
