PtFLC选择性剪切本的遗传转化及功能分析
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-24页 |
| ·课题的提出 | 第11页 |
| ·植物成花调控的四条主要途径 | 第11-16页 |
| ·光周期途径 | 第13页 |
| ·自主途径 | 第13-14页 |
| ·春化途径 | 第14-15页 |
| ·赤霉素途径 | 第15-16页 |
| ·FLC在植物开花时间调控网络的重要地位 | 第16-18页 |
| ·植物转基因应用概述 | 第18-20页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第18-19页 |
| ·转化受体系统的类型 | 第19页 |
| ·转化载体插入基因 | 第19-20页 |
| ·筛选标记基因 | 第19页 |
| ·报告基因 | 第19-20页 |
| ·融合标签抗体 | 第20页 |
| ·选择性剪切的相关研究 | 第20-22页 |
| ·选择性剪切的进展 | 第20-21页 |
| ·选择性剪切发生的频率和结果 | 第21页 |
| ·选择性剪切影响蛋白复杂性及转录水平 | 第21-22页 |
| ·选择性剪接对植物生物钟的影响 | 第22页 |
| ·本研究的内容及意义 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-38页 |
| ·转化植物材料 | 第24页 |
| ·菌株、质粒及试剂 | 第24-25页 |
| ·载体构建 | 第25-31页 |
| ·PCR扩增PtFLC不同转录本 | 第26-27页 |
| ·扩增产物的回收、克隆及测序 | 第27-28页 |
| ·目的片段回收纯化 | 第27页 |
| ·目的片段连接载体 | 第27-28页 |
| ·目的片段转化大肠杆菌 | 第28页 |
| ·转化子的PCR阳性检测 | 第28页 |
| ·目标片段的测序 | 第28页 |
| ·大肠杆菌中质粒的提取 | 第28-29页 |
| ·酶切 | 第29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及目的基因的回收 | 第29-30页 |
| ·目的片段与表达载体连接 | 第30页 |
| ·转化及质粒提取 | 第30页 |
| ·融合载体转化农杆菌 | 第30页 |
| ·菌落阳性检测 | 第30-31页 |
| ·实验所用的各种培养基配方 | 第31页 |
| ·细菌培养基 | 第31页 |
| ·转化早实枳上胚轴所用各培养基配方 | 第31页 |
| ·转化椪柑愈伤所用各培养基配方 | 第31页 |
| ·根癌农杆菌介导的早实枳遗传转化 | 第31-34页 |
| ·早实枳种子的无菌处理及上胚轴的培养 | 第31-32页 |
| ·农杆菌菌液的复苏与准备 | 第32页 |
| ·转化和共培养 | 第32页 |
| ·潮霉素梯度筛选培养 | 第32-33页 |
| ·抗性芽的获得及丛生芽的伸长生长 | 第33页 |
| ·无菌苗的生根及移栽、嫁接 | 第33-34页 |
| ·根癌农杆菌介导的碰柑愈伤遗传转化 | 第34-35页 |
| ·胚性椪柑愈伤组织对潮霉素的敏感性分析 | 第34页 |
| ·载体转化椪柑愈伤组织 | 第34页 |
| ·潮霉素梯度筛选培养 | 第34页 |
| ·抗性愈伤的扩繁及胚状体的诱导 | 第34-35页 |
| ·转基因苗的分子生物学检测 | 第35-36页 |
| ·DNA提取 | 第35页 |
| ·PCR检测 | 第35页 |
| ·RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·RNA质量检测及反转录 | 第36页 |
| ·cDNA检测 | 第36页 |
| ·转基因植株qRT-PCR分析 | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-54页 |
| ·表达载体构建 | 第38-39页 |
| ·转化早实枳上胚轴 | 第39-51页 |
| ·早实枳上胚轴转化植株的筛选与再生 | 第39-42页 |
| ·再生率与转化率统计 | 第42-43页 |
| ·转化再生过程中的荧光检测 | 第43-44页 |
| ·转基因植株的分子鉴定 | 第44-46页 |
| ·转基因植株的qRT-PCR分析 | 第46-48页 |
| ·FLC的表达分析 | 第46-47页 |
| ·FLC下游靶基因的表达分析 | 第47-48页 |
| ·转基因技术引起的异常表型 | 第48-49页 |
| ·结瘤组织不定芽发生过程的细胞学观察及分析 | 第49-51页 |
| ·转化椪柑愈伤 | 第51-54页 |
| ·胚性椪柑愈伤对潮霉素的敏感性分析 | 第51-52页 |
| ·转化椪柑抗性愈伤的获得与增殖 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-59页 |
| ·PtFLC选择性剪切的意义 | 第54-57页 |
| ·早实枳实生苗茎段的遗传转化中筛选剂的使用 | 第57页 |
| ·研究展望 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 附录 | 第67-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
