| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1. 文献综述 | 第11-19页 |
| ·PRRSV的分子生物学特征 | 第11-15页 |
| ·PRRSV基因组结构 | 第11-12页 |
| ·PRRSV非结构蛋白的功能 | 第12-13页 |
| ·PRRSV结构蛋白的功能 | 第13-15页 |
| ·PRRSV体液免疫和细胞免疫的研究进展 | 第15页 |
| ·PRRSV体液免疫研究进展 | 第15页 |
| ·PRRSV细胞免疫研究进展 | 第15页 |
| ·PRRSV疫苗研究进展 | 第15-16页 |
| ·弱毒活疫苗 | 第15-16页 |
| ·灭活疫苗 | 第16页 |
| ·基因工程疫苗 | 第16页 |
| ·PRRSV诊断方法的研究进展 | 第16-18页 |
| ·临床症状与病理变化 | 第16-17页 |
| ·病毒分离与分子生物学诊断方法 | 第17页 |
| ·血清学诊断 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 2. 材料和方法 | 第19-34页 |
| ·材料 | 第19-22页 |
| ·毒株,菌株,实验动物和多肽 | 第19页 |
| ·载体与试剂 | 第19页 |
| ·引物的设计与合成 | 第19-20页 |
| ·抗体 | 第20页 |
| ·血清 | 第20页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot试剂和溶液 | 第20页 |
| ·培养基的配制 | 第20-21页 |
| ·间接ELISA所需试剂的配制 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·其他试剂耗材 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-34页 |
| ·PRRSV病毒的培养 | 第22页 |
| ·PRRSV的RNA提取 | 第22-23页 |
| ·PRRSV ORF7基因的PCR扩增与检测 | 第23页 |
| ·PCR产物的回收和纯化 | 第23-24页 |
| ·纯化产物和T载体连接 | 第24页 |
| ·连接产物转化到DH5α | 第24页 |
| ·重组质粒的提取 | 第24-25页 |
| ·ORF7基因片段的序列测定及分析 | 第25页 |
| ·原核表达载体pET32a-ORF7的构建 | 第25-27页 |
| ·重组表达质粒转化到大肠杆菌BL_(21)(DE3)感受态 | 第27页 |
| ·重组表达质粒pET32a-ORF7在大肠杆菌BE_(21)(DE3)中的诱导表达 | 第27页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第27-28页 |
| ·表达产物的纯化 | 第28-30页 |
| ·表达产物的Western blot检测 | 第30页 |
| ·PRRSV N蛋白两个抗原表位的合成肽的分析与合成 | 第30-31页 |
| ·间接ELISA方法的操作程序 | 第31页 |
| ·重组N蛋白,P30,P32间接ELISA方法最佳反应条件的确定 | 第31-34页 |
| 3. 结果与分析 | 第34-50页 |
| ·ORF7基因PCR扩增结果 | 第34页 |
| ·原核表达载体pET32a-ORF7鉴定 | 第34-35页 |
| ·原核表达载体pET32a-ORF7在大肠杆菌中的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·表达产物的纯化 | 第36页 |
| ·纯化蛋白的浓度的测定 | 第36页 |
| ·表达产物的Western blot鉴定 | 第36-37页 |
| ·N蛋白抗原表位的合成肽P30和P32的选取 | 第37页 |
| ·间接ELISA方法最佳反应条件的确定 | 第37-50页 |
| ·合成肽最佳包被浓度和血清最佳稀释倍数的确定 | 第37-39页 |
| ·最佳二抗稀释倍数的确定 | 第39-40页 |
| ·判定标准的确定 | 第40-41页 |
| ·特异性试验结果 | 第41页 |
| ·敏感性试验 | 第41-42页 |
| ·重复性试验结果 | 第42-44页 |
| ·临床样品检测 | 第44-50页 |
| 4. 讨论 | 第50-53页 |
| ·PRRSV ORF7基因的选择 | 第50页 |
| ·N蛋白两个抗原表位的选择 | 第50-51页 |
| ·关于间接ELISA方法的建立 | 第51页 |
| ·建立的ELISA方法和商品化试剂盒的比较 | 第51-53页 |
| 5. 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
