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猪APC1和APC2基因的分离、鉴定及其功能的初步研究

摘要第1-13页
Abstract第13-16页
中英文缩写对照表第16-17页
第一章 文献综述第17-37页
 1 前言第17-18页
 2 脂肪细胞的分化与其相关的转录因子第18-23页
   ·脂肪细胞的来源及分化第18-19页
     ·间充质干细胞第18页
     ·脂肪母细胞第18页
     ·前体脂肪细胞第18页
     ·成熟脂肪细胞第18-19页
   ·影响脂肪细胞分化的转录因子第19-23页
     ·过氧化物酶体增殖物激活受体家族第20-21页
     ·CAAT/增强子结合蛋白家族第21-22页
     ·固醇调节元件结合蛋白家族第22-23页
 3 Wnt/β-catenin信号通路概述第23-28页
   ·Wnt/β-catenin信号通路的主要成员第23-25页
     ·Wnt蛋白第23-24页
     ·Frizzled蛋白第24页
     ·β-catenin蛋白第24页
     ·Dishevelled蛋白第24页
     ·LEF-1/TCF转录因子家族第24-25页
   ·Wnt/β-catenin信号通路与脂肪形成第25-28页
     ·Wnt/β-catenin信号通路的信号传递第25-26页
     ·Wnt/β-catenin信号通路与脂肪形成第26-27页
     ·Wnt/β-catenin信号通路调控脂肪形成的机制第27-28页
 4 APC基因家族的研究进展第28-31页
   ·APC基因家族概述第28页
   ·APC蛋白的结构特征第28-30页
   ·APC基因家族的功能特征第30页
   ·APC基因家族与Wnt/β-catenin信号通路第30-31页
 5 脂肪组织源性间充质干细胞概述第31-34页
   ·脂肪组织源性间充质干细胞的特征第31-32页
   ·脂肪组织源性间充质干细胞的分化潜能第32-33页
     ·成脂分化潜能第32页
     ·成肌分化潜能第32-33页
     ·成骨分化潜能第33页
     ·其他类型细胞分化潜能第33页
   ·脂肪组织源性间充质干细胞的应用第33-34页
 6 多不饱和脂肪酸概述第34-36页
   ·多不饱和脂肪酸的分类第34页
   ·多不饱和脂肪酸的生物学功能第34-36页
     ·多不饱和脂肪酸与脂肪代谢第34-35页
     ·多不饱和脂肪酸与肿瘤形成第35-36页
     ·不饱和脂肪酸与系统免疫第36页
 7 研究的目的与意义第36-37页
第二章 猪APC家族的分离克隆、生物信息学和组织表达分析第37-58页
 1 前言第37页
 2 试验材料和试剂第37-39页
   ·试验材料第37-38页
     ·试验动物第37页
     ·组织样品第37-38页
     ·载体和菌株第38页
   ·试验主要试剂、仪器和主要溶液的配制第38-39页
     ·主要试剂第38页
     ·主要仪器第38页
     ·主要溶液的配制第38-39页
     ·主要分子生物学软件第39页
     ·主要数据库第39页
 3 试验方法第39-43页
   ·猪APC1和APC2基因的分离克隆第39页
   ·RT-PCR扩增目的基因第39-40页
   ·PCR产物的回收与纯化第40页
   ·载体连接第40页
   ·转化连接产物第40页
   ·阳性克隆的鉴定和测序第40页
   ·猪APC基因家族的生物信息学分析第40-41页
     ·猪APC基因家族的染色体定位第40-41页
     ·猪APC基因家族的序列分析第41页
     ·猪APC基因家族氨基酸序列多重比对和进化分析第41页
   ·猪APC基因家族的组织表达分析第41-43页
     ·组织样品总RNA的提取第41页
     ·总RNA的纯化第41-42页
     ·反转录合成cDNA的第一条链第42页
     ·组织表达分析第42-43页
 4 结果与分析第43-54页
   ·猪APC基因家族的分离克隆与序列分析第43-45页
   ·猪APC基因家族的生物信息学分析第45-53页
     ·猪APC基因家族的染色体定位第45页
     ·猪APC基因家族的氨基酸序列及其理化性质分析第45-53页
   ·猪APC基因家族的组织表达分析第53-54页
 5 讨论第54-58页
   ·猪APC基因家族的分离克隆与序列分析第54-55页
   ·猪APC基因家族的生物信息学分析第55-57页
     ·染色体定位第55页
     ·保守结构域的预测第55-56页
     ·蛋白进化分析第56页
     ·启动子分析第56-57页
   ·组织表达分析第57-58页
第三章 多不饱和脂肪酸对猪ADSCs中APC基因家族表达的影响第58-69页
 1 前言第58页
 2 试验材料和试剂第58-60页
   ·试验材料第58-59页
     ·试验动物第58页
     ·试验器械第58-59页
   ·试验主要试剂、仪器和主要溶液的配制第59-60页
     ·主要试剂第59页
     ·主要仪器第59页
     ·主要溶液的配制第59-60页
 3 试验方法第60-63页
   ·猪ADSCs的分离培养第60-61页
     ·猪ADSCs的分离第60页
     ·猪ADSCs的传代培养第60页
     ·猪ADSCs的冻存和复苏第60-61页
   ·猪ADSCs的鉴定第61-62页
     ·免疫组织化学第61页
     ·分子生物学鉴定第61-62页
   ·多不饱和脂肪酸的诱导处理第62页
   ·细胞收集及总RNA的提取第62页
   ·反转录合成cDNA的第一条链第62页
   ·荧光定量PCR第62页
     ·荧光定量PCR引物的设计第62页
     ·定量PCR体系及扩增条件第62页
   ·统计分析第62-63页
 4 结果与分析第63-67页
   ·猪ADSCs的分离培养第63-64页
   ·猪ADSCs的鉴定第64-65页
     ·免疫组织化学鉴定第64页
     ·分子生物学鉴定第64-65页
   ·多不饱和脂肪酸对猪ADSCs中APC基因家族表达的影响第65-67页
     ·ω-3 PUFA对猪ADSCs中APC基因家族表达的影响第65-66页
     ·ω-6 PUFA对猪ADSCs中APC基因家族表达的影响第66-67页
 5 讨论第67-69页
   ·猪ADSCs的分离培养第67页
   ·猪ADSCs的鉴定第67页
   ·多不饱和脂肪酸对猪ADSCs中APC基因家族表达的影响第67-69页
第四章 猪APC基因家族在脂肪细胞分化过程的作用第69-80页
 1 前言第69-70页
 2 试验材料和试剂第70-71页
   ·试验材料第70页
     ·试验动物第70页
     ·试验器械第70页
   ·试验主要试剂、仪器和主要溶液的配制第70-71页
     ·主要试剂第70页
     ·主要仪器第70页
     ·主要溶液的配制第70-71页
 3 试验方法第71-73页
   ·猪ADSCs细胞的分离培养第71页
   ·猪ADSCs细胞的鉴定第71页
   ·猪ADSCs诱导分化第71-72页
   ·油红O染色第72页
   ·细胞收集及总RNA的提取第72页
   ·反转录合成cDNA的第一条链第72页
   ·荧光定量PCR第72页
     ·荧光定量PCR引物的设计第72页
     ·定量PCR体系及扩增条件第72页
   ·Western Blot第72-73页
     ·细胞总蛋白提取第72-73页
     ·SDS-PAGE电泳第73页
     ·免疫印迹第73页
   ·统计分析第73页
 4 结果与分析第73-77页
   ·猪ADSCs定向诱导分化为脂肪细胞第73-75页
     ·形态学变化第73-74页
     ·脂肪形成标志基因表达变化第74-75页
   ·APC基因家族在脂肪细胞分化过程的作用第75-76页
   ·Wnt/β-catenin信号通路相关基因在脂肪细胞分化过程中的表达第76-77页
 5 讨论第77-80页
   ·猪ADSCs定向诱导分化为脂肪细胞第77-78页
   ·APC基因家族在脂肪细胞分化过程的作用第78-80页
主要创新点第80页
下一步工作计划第80-81页
参考文献第81-91页
附录第91-104页
致谢第104页

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