| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-19页 |
| 缩略语表 | 第19-20页 |
| 第一部分 文献综述 | 第20-34页 |
| 1 哺乳动物单性生殖胚胎研究意义 | 第20-24页 |
| ·单性生殖胚胎应用于基因组印记研究 | 第20-22页 |
| ·单性生殖胚胎干细胞的应用 | 第22-23页 |
| ·孤雄生殖胚胎应用于哺乳动物基因修饰 | 第23-24页 |
| 2 家畜单性生殖胚胎发育存在的问题 | 第24-31页 |
| ·精子注射技术缺陷与预处理的必要性 | 第24-28页 |
| ·家畜精子注射技术存在的问题 | 第24-26页 |
| ·精子预处理应当模仿正常受精过程 | 第26-28页 |
| ·供体母畜热应激对卵母细胞质量的损害及其衡量方法的缺陷 | 第28-31页 |
| ·母畜热应激改变了卵母细胞发育环境 | 第29-30页 |
| ·母畜热应激损害卵母细胞质量 | 第30页 |
| ·母畜热应激降低卵母细胞发育能力 | 第30页 |
| ·以季节评价母畜热应激的缺陷 | 第30-31页 |
| 3 甜菜碱的潜在抗热应激作用与体外细胞模型优势 | 第31-33页 |
| ·目前尚无减弱母牛热应激危害的有效营养管理方案 | 第31-32页 |
| ·甜菜碱的生理功能与抗母牛热应激应用潜力 | 第32页 |
| ·三维培养的乳腺上皮细胞模型是理想的奶牛热应激研究工具 | 第32-33页 |
| 4 本研究目的和意义 | 第33-34页 |
| 第二部分 实验研究 | 第34-102页 |
| 实验研究一：精子预处理对牛精子顶体及质膜的影响 | 第34-51页 |
| 1 引言 | 第34-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-40页 |
| ·实验材料 | 第35-37页 |
| ·主要仪器和设备 | 第35-36页 |
| ·主要试剂和药品 | 第36页 |
| ·溶液与培养液的配方及配制 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-39页 |
| ·精子的准备和处理 | 第37页 |
| ·精子顶体和质膜状态测定 | 第37-38页 |
| ·精子活力的评价 | 第38页 |
| ·精子染色质完整性的评价 | 第38页 |
| ·精子去凝缩测试 | 第38-39页 |
| ·实验设计 | 第39-40页 |
| ·精子顶体和质膜状态测定 | 第39页 |
| ·精子活力的评价 | 第39页 |
| ·精子染色质完整性的评价 | 第39-40页 |
| ·精子去凝缩测试 | 第40页 |
| ·数据统计 | 第40页 |
| 3 实验结果 | 第40-47页 |
| ·精子获能可提高顶体和质膜的去除效率 | 第40-44页 |
| ·去除顶体和质膜对精子活力的影响 | 第44页 |
| ·去除顶体和质膜对精子染色质完整性的影响 | 第44-45页 |
| ·精子获能和顶体、质膜的去除有利于精子的去凝缩 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| ·获能对精子膜的稳定性的影响 | 第47页 |
| ·顶体和质膜去除方法及其安全性 | 第47-49页 |
| ·获能和去除顶体与质膜在精子去凝缩过程中的作用 | 第49-50页 |
| 5 小结 | 第50-51页 |
| 实验研究二：精子获能联合顶体和质膜去除对牛孤雄胚胎发育的影响 | 第51-70页 |
| 1 引言 | 第51-52页 |
| 2 材料与方法 | 第52-59页 |
| ·实验材料 | 第52-55页 |
| ·主要仪器和设备 | 第52-53页 |
| ·主要试剂和药品 | 第53页 |
| ·培养液的配制 | 第53-54页 |
| ·捡卵针和显微操作针的制作 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-58页 |
| ·精子的准备 | 第55页 |
| ·卵母细胞的准备 | 第55-56页 |
| ·卵母细胞去核 | 第56页 |
| ·精子注射 | 第56-57页 |
| ·胚胎的激活和体外培养 | 第57页 |
| ·细胞学检测 | 第57页 |
| ·胚胎移植 | 第57-58页 |
| ·实验设计 | 第58页 |
| ·精子处理和胚胎分组 | 第58页 |
| ·精子获能和预处理对精子卵胞质内解聚的影响 | 第58页 |
| ·精子获能和预处理对孤雄胚胎发育的影响 | 第58页 |
| ·数据统计 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-65页 |
| ·精子预处理对孤雄生殖胚胎内两个精子同步解聚和原核形成的影响 | 第59-64页 |
| ·精子预处理对精子克隆孤雄胚发育潜能的影响 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-69页 |
| ·精子获能对精子能育力的影响 | 第66-67页 |
| ·顶体和质膜的去除有利于注射后精子的染色质重构 | 第67-68页 |
| ·精子克隆孤雄胚胎发育受限因素 | 第68-69页 |
| 5 小结 | 第69-70页 |
| 实验研究三：母牛热应激对牛单性生殖胎发育的影响 | 第70-85页 |
| 1 引言 | 第70-71页 |
| 2 材料与方法 | 第71-76页 |
| ·实验材料 | 第71-73页 |
| ·主要仪器与设备 | 第71页 |
| ·主要试剂和药品 | 第71页 |
| ·培养液的配制 | 第71-72页 |
| ·捡卵针和显微操作针的制作 | 第72页 |
| ·气象数据 | 第72-73页 |
| ·实验方法 | 第73-74页 |
| ·卵母细胞和精子的准备 | 第73页 |
| ·卵母细胞成熟的观察 | 第73页 |
| ·ICSI胚胎的生产 | 第73页 |
| ·孤雌生殖胚胎生产 | 第73页 |
| ·孤雄生殖胚胎的生产 | 第73页 |
| ·胚胎体外培养与观察记录 | 第73-74页 |
| ·实验设计 | 第74-75页 |
| ·武汉地区气象数据的统计 | 第74页 |
| ·热应激对卵母细胞成熟率和体外胚胎发育的影响 | 第74-75页 |
| ·THI与卵母细胞体外成熟率和胚胎发育率的相关性分析 | 第75页 |
| ·统计分析 | 第75-76页 |
| 3 结果 | 第76-81页 |
| ·湖北武汉地区热应激天气概况 | 第76-77页 |
| ·母牛热应激对卵母细胞成熟率的影响 | 第77页 |
| ·母牛热应激对ICSI胚胎发育的影响 | 第77-78页 |
| ·母牛热应激对孤雌生殖胚胎发育的影响 | 第78-79页 |
| ·母牛热应激对孤雄生殖胚胎发育的影响 | 第79-80页 |
| ·采卵前THI与卵母细胞体外成熟率和单性生殖胚胎发育率的相关性分析 | 第80-81页 |
| 4 讨论 | 第81-84页 |
| ·THI是热应激效应的重要指示标志 | 第82-83页 |
| ·母畜热应激对卵母细胞质量和发育潜力的影响 | 第83-84页 |
| 5 小结 | 第84-85页 |
| 实验研究四：甜菜碱的抗热应激生理功能研究 | 第85-102页 |
| 1 引言 | 第85-86页 |
| 2 材料方法 | 第86-94页 |
| ·实验材料 | 第86-88页 |
| ·主要仪器与设备 | 第86-87页 |
| ·主要试剂与药品来源 | 第87页 |
| ·培养液与溶液的配制 | 第87-88页 |
| ·实验方法 | 第88-92页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的分离 | 第88页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的三维培养 | 第88-89页 |
| ·提取RNA | 第89页 |
| ·基因组DNA的去除和cDNA合成 | 第89-90页 |
| ·实时定量PCR | 第90页 |
| ·TUNEL法细胞凋亡检测 | 第90-91页 |
| ·细胞活力和增殖检测 | 第91-92页 |
| ·实验设计 | 第92-93页 |
| ·甜菜碱处理对奶牛乳腺上皮细胞中高温诱导的热应激反应的影响 | 第92页 |
| ·甜菜碱对热应激诱导的乳腺上皮细胞凋亡的影响 | 第92页 |
| ·甜菜碱对乳腺上皮细胞活力和增殖的影响 | 第92-93页 |
| ·数据统计 | 第93-94页 |
| 3 结果 | 第94-98页 |
| ·甜菜碱对乳腺上皮细胞活力和增殖的影响 | 第94页 |
| ·甜菜碱能减弱热应激诱导的细胞凋亡 | 第94-95页 |
| ·甜菜碱对牛乳腺上皮细胞中热休克蛋白表达的双重作用 | 第95-98页 |
| 4 讨论 | 第98-101页 |
| ·甜菜碱对热休克的细胞中热应激反应的影响 | 第98-99页 |
| ·甜菜碱对热休克的细胞活力和凋亡的影响 | 第99-100页 |
| ·甜菜碱对细胞生长的影响 | 第100-101页 |
| 5 小结 | 第101-102页 |
| 第三部分 全文结论 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-133页 |
| 致谢 | 第133-135页 |
| 附录 | 第135-136页 |
