| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-21页 |
| ·流感病毒 | 第14-16页 |
| ·流感病毒病原学 | 第14页 |
| ·流感病毒血凝素 HA | 第14-15页 |
| ·HA 的切割位点序列影响流感病毒的致病力 | 第15-16页 |
| ·II 型跨膜丝氨酸蛋白酶结构特征与功能 | 第16-20页 |
| ·II 型跨膜丝氨酸蛋白酶对流感病毒 HA 的切割活化 | 第17-18页 |
| ·TMPRSS2、TMPRSS4、HAT 和 MSPL 的结构域组成 | 第18-19页 |
| ·TMPRSS2、TMPRSS4、HAT 和 MSPL 的细胞分布 | 第19页 |
| ·TMPRSS2、TMPRSS4、HAT 和 MSPL 的组织表达 | 第19-20页 |
| ·目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 几种丝氨酸蛋白酶对 SC HA 的切割活化 | 第21-31页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·病毒株和细胞 | 第21页 |
| ·质粒 | 第21页 |
| ·高免血清和实验动物 | 第21页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第21-22页 |
| ·实验部分 | 第22-24页 |
| ·表达 II 型跨膜丝氨酸蛋白酶质粒的构建与鉴定 | 第22页 |
| ·表达 HA1-F1 和 HA1-F2 的原核表达质粒的构建与鉴定 | 第22-23页 |
| ·融合蛋白 HA1-F1 和 HA1-F2 诱导表达及蛋白纯化 | 第23页 |
| ·抗 HA1 的抗血清制备 | 第23页 |
| ·II 型跨膜丝氨酸蛋白酶的表达 | 第23页 |
| ·II 型跨膜丝氨酸蛋白酶对 SC HA 切割的 Western Blot 分析 | 第23-24页 |
| ·激光共聚焦免疫荧光 | 第24页 |
| ·细胞融合试验 | 第24页 |
| ·结果 | 第24-29页 |
| ·表达 II 型跨膜丝氨酸蛋白酶基因重组质粒的鉴定 | 第24-25页 |
| ·表达 HA1-F1 和 HA1-F2 片段重组质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| ·诱导表达蛋白 HA1-F1 和蛋白 HA1-F2 | 第26页 |
| ·原核表达蛋白 HA1-F1 和蛋白 HA1-F2 的纯化及鉴定 | 第26-27页 |
| ·丝氨酸蛋白酶融合 Flag 标签蛋白在转染细胞中的表达 | 第27页 |
| ·丝氨酸蛋白酶融合 Flag 标签蛋白在转染细胞中对 SC HA 的切割 | 第27-28页 |
| ·TTSPs-Flag 与 SC HA 在细胞膜上的表达及共定位 | 第28-29页 |
| ·TTSPs-Flag 切割的 HA 蛋白在低 pH 条件下介导细胞膜发生融合 | 第29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 稳定表达丝氨酸蛋白酶的 MDCK 细胞系的构建 | 第31-40页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·病毒株和细胞 | 第31页 |
| ·质粒 | 第31页 |
| ·高免血清和实验动物 | 第31页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第31页 |
| ·MDCK 细胞系的构建 | 第31-34页 |
| ·表达 II 型跨膜丝氨酸蛋白酶重组 P4 质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·确定最佳 G418 筛选浓度 | 第32页 |
| ·电转染 MDCK 细胞及抗性细胞克隆的筛选 | 第32页 |
| ·RT-PCR 鉴定 | 第32页 |
| ·Western Blot | 第32-33页 |
| ·流式细胞术检测细胞系外源蛋白表达的稳定性 | 第33页 |
| ·流感病毒疫苗株 Re-5、Re-6 和 Re-20 在细胞系上的感染实验 | 第33页 |
| ·MDCK-TMPRSS2-eGFP 和 MDCK-MSPL-eGFP 的病毒敏感性实验 | 第33-34页 |
| ·Re-5、Re-6 和 Re-20 在 MDCK-TMPRSS2-eGFP 和 MDCK-MSPL-eGFP 上的生长动力学 | 第34页 |
| ·结果 | 第34-39页 |
| ·表达 TMPRSS2 和 MSPL 的重组 P4 质粒的鉴定 | 第34-35页 |
| ·表达 TMPRSS2 和 MSPL 的 MDCK 细胞系的建立 | 第35页 |
| ·RT-PCR 鉴定 | 第35-36页 |
| ·Western blot | 第36页 |
| ·流式细胞术 | 第36页 |
| ·Re-5、Re-6 和 Re-20 在 MDCK-TMPRSS2-eGFP 和 MDCK-MSPL-eGFP 上的感染实验 | 第36-37页 |
| ·细胞系 MDCK-TMPRSS2-eGFP 和 MDCK-MSPL-eGFP 的病毒敏感性实验 | 第37-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 全文结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 附录 | 第45-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简历 | 第52页 |
