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猪Gpr3基因特征、表达及其对卵泡颗粒细胞的影响

目录第1-9页
摘要第9-12页
ABSTRACT第12-17页
縮略语中英文对照(Abbreviaiton).第17-18页
第一部分 文献综述第18-60页
 第一章 哺乳动物卵子发生与卵泡发育的调控第18-38页
  1 卵子发生第18-25页
   ·卵子发生过程第18-20页
   ·卵子发生过程中的调控机制第20-23页
   ·卵子发生和卵泡发育的联系第23-25页
  2 卵泡发育第25-32页
   ·卵泡发育过程第25-28页
   ·卵泡发育的调控第28-29页
   ·颗粒细胞与卵泡发育和闭锁的联系第29-32页
  参考文献第32-38页
 第二章 G蛋白偶联受体3的研究进展第38-60页
  1 G蛋白偶联受体介导的信号通路概述第38-40页
  2 Gpr3的研究进展第40-50页
   ·Gpr3基因的研究历史第40-41页
   ·Gpr3基因的结构特点第41页
   ·Gpr3基因定位及组织分布第41-42页
   ·Gpr3基因的功能第42-49页
   ·Gpr3配体的研究进展第49-50页
  3 研究的目的和意义第50页
  参考文献第50-60页
第二部分 试验研究第60-180页
 第三章 猪Gpr3基因的克隆鉴定及生物信息学分析第60-88页
  摘要第60-61页
  1 材料与方法第61-73页
   ·材料第61-62页
   ·方法第62-73页
  2 结果与分析第73-82页
   ·PCR扩增猪Gpr3/6/12基因的ORF区第73-74页
   ·RACE和PCR扩增Gpr3的5'UTR、3'UTR和内含子区第74-75页
   ·Gpr3序列拼接及Spidey分析第75页
   ·生物信息学分析第75-82页
  3 讨论第82-84页
   ·Gpr3亚家族基因克隆的策略第82-83页
   ·Gpr3亚家族生物信息学分析第83-84页
  4 小结第84页
  参考文献第84-88页
 第四章 猪Gpr3的组织分布与卵母细胞体外成熟过程中的表达规律分析第88-108页
  摘要第88-89页
  1 材料与方法第89-95页
   ·材料第89-90页
   ·方法第90-95页
  2 结果与分析第95-101页
   ·GAPDH检测各组织及细胞总RNA的反转录效果第95页
   ·猪Gpr3的组织表达谱分析第95-98页
   ·卵丘细胞扩散评分第98-99页
   ·Gpr3与MPF亚基在卵母细胞体外成熟过程中的表达规律分析第99-101页
  3 讨论第101-103页
  4 小结第103-104页
  参考文献第104-108页
 第五章 Gpr3在猪卵巢组织中的时空表达规律研究第108-128页
  摘要第108-109页
  1 材料与方法第109-114页
   ·材料第109-110页
   ·方法第110-114页
  2 结果与分析第114-124页
   ·猪卵巢卵泡发育的组织形态学分析第114-116页
   ·猪Gpr3蛋白在不同发育时期卵巢中的表达定位第116-118页
   ·猪Gpr3蛋白在不同发育时期卵泡细胞中的表达变化第118-119页
   ·猪Gpr3 mRNA和蛋白在不同发育时期卵巢中的表达规律分析第119-121页
   ·猪Gpr3 mRNA和蛋白在不同直径卵巢卵泡中的表达规律分析第121-122页
   ·猪Gpr3 mRNA和蛋白在不同品种猪卵巢中的表达规律分析第122-124页
  3 讨论第124-125页
  4 小结第125-126页
  参考文献第126-128页
 第六章 S1P对猪Gpr3受体组成性活性的影响第128-148页
  摘要第128-129页
  1 材料与方法第129-136页
   ·材料第129-130页
   ·方法第130-136页
  2 结果与分析第136-144页
   ·猪Gpr3重组质粒的鉴定第136-137页
   ·质粒转染HEK293细胞效率的检测第137页
   ·质粒转染对猪Gpr3表达的影响第137-138页
   ·猪Gpr3亚细胞定位第138-139页
   ·猪Gpr3组成性活性的鉴定第139-140页
   ·S1P对猪Gpr3组成性活性的影响第140-142页
   ·鞘氨醇和鞘磷脂对猪Gpr3组成性活性的影响第142页
   ·S1P对绿色荧光蛋白标记的猪Gpr3受体内化作用的影响第142-144页
  3 讨论第144-145页
  4 小结第145页
  参考文献第145-148页
 第七章 阻抑Gpr3信号通路对猪卵泡颗粒细胞生长与分化的影响第148-166页
  摘要第148-149页
  1 材料与方法第149-154页
   ·材料第149-150页
   ·方法第150-154页
  2 结果与分析第154-161页
   ·引物扩增效果检测第154-155页
   ·siRNA转染猪颗粒细胞的效率检测第155页
   ·RNAi的方法抑制Gpr3的表达第155-157页
   ·阻抑Gpr3信号通路对颗粒细胞生长的影响第157页
   ·阻抑Gpr3信号通路对颗粒细胞周期的影响第157-158页
   ·阻抑Gpr3信号通路对细胞周期相关因子的影响第158页
   ·阻抑Gpr3信号通路对颗粒细胞凋亡的影响第158-159页
   ·阻抑Gpr3信号通路对细胞凋亡相关基因表达的影响第159页
   ·阻抑Gpr3信号通路对颗粒细胞分泌雌二醇和孕酮的影响第159-160页
   ·阻抑Gpr3信号通路对Gpr3亚家族其它成员mRNA表达的影响第160-161页
  3 讨论第161-163页
  4 小结第163页
  参考文献第163-166页
 第八章 超表达Gpr3对猪卵泡颗粒细胞生长与分化的影响第166-180页
  摘要第166-167页
  1 材料与方法第167-169页
   ·材料第167页
   ·方法第167-169页
  2 结果与分析第169-176页
   ·GFP重组载体的鉴定第169页
   ·质粒转染颗粒细胞效率的检测第169-170页
   ·质粒转染对Gpr3表达的影响第170-171页
   ·超表达Gpr3对颗粒细胞生长的影响第171-172页
   ·超表达Gpr3对颗粒细胞周期的影响第172-173页
   ·超表达Gpr3对细胞周期相关因子的影响第173页
   ·超表达Gpr3对颗粒细胞凋亡的影响第173-174页
   ·超表达Gpr3对细胞凋亡相关基因表达的影响第174-175页
   ·超表达Gpr3对颗粒细胞分泌雌二醇和孕酮的影响第175页
   ·超表达Gpr3对类固醇合成相关酶表达的影响第175页
   ·超表达Gpr3对Gpr3亚家族其它成员mRNA表达的影响第175-176页
  3 讨论第176-177页
  4 小结第177页
  参考文献第177-180页
全文结论第180-182页
创新点第182-184页
附录一 主要溶液的配制第184-188页
附录二 哺乳动物Gpr3亚家族编码区比对结果第188-200页
致谢第200-202页
攻读博士期间发表及待发表的论文第202-203页

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