目录 | 第1-9页 |
摘要 | 第9-12页 |
ABSTRACT | 第12-17页 |
縮略语中英文对照(Abbreviaiton). | 第17-18页 |
第一部分 文献综述 | 第18-60页 |
第一章 哺乳动物卵子发生与卵泡发育的调控 | 第18-38页 |
1 卵子发生 | 第18-25页 |
·卵子发生过程 | 第18-20页 |
·卵子发生过程中的调控机制 | 第20-23页 |
·卵子发生和卵泡发育的联系 | 第23-25页 |
2 卵泡发育 | 第25-32页 |
·卵泡发育过程 | 第25-28页 |
·卵泡发育的调控 | 第28-29页 |
·颗粒细胞与卵泡发育和闭锁的联系 | 第29-32页 |
参考文献 | 第32-38页 |
第二章 G蛋白偶联受体3的研究进展 | 第38-60页 |
1 G蛋白偶联受体介导的信号通路概述 | 第38-40页 |
2 Gpr3的研究进展 | 第40-50页 |
·Gpr3基因的研究历史 | 第40-41页 |
·Gpr3基因的结构特点 | 第41页 |
·Gpr3基因定位及组织分布 | 第41-42页 |
·Gpr3基因的功能 | 第42-49页 |
·Gpr3配体的研究进展 | 第49-50页 |
3 研究的目的和意义 | 第50页 |
参考文献 | 第50-60页 |
第二部分 试验研究 | 第60-180页 |
第三章 猪Gpr3基因的克隆鉴定及生物信息学分析 | 第60-88页 |
摘要 | 第60-61页 |
1 材料与方法 | 第61-73页 |
·材料 | 第61-62页 |
·方法 | 第62-73页 |
2 结果与分析 | 第73-82页 |
·PCR扩增猪Gpr3/6/12基因的ORF区 | 第73-74页 |
·RACE和PCR扩增Gpr3的5'UTR、3'UTR和内含子区 | 第74-75页 |
·Gpr3序列拼接及Spidey分析 | 第75页 |
·生物信息学分析 | 第75-82页 |
3 讨论 | 第82-84页 |
·Gpr3亚家族基因克隆的策略 | 第82-83页 |
·Gpr3亚家族生物信息学分析 | 第83-84页 |
4 小结 | 第84页 |
参考文献 | 第84-88页 |
第四章 猪Gpr3的组织分布与卵母细胞体外成熟过程中的表达规律分析 | 第88-108页 |
摘要 | 第88-89页 |
1 材料与方法 | 第89-95页 |
·材料 | 第89-90页 |
·方法 | 第90-95页 |
2 结果与分析 | 第95-101页 |
·GAPDH检测各组织及细胞总RNA的反转录效果 | 第95页 |
·猪Gpr3的组织表达谱分析 | 第95-98页 |
·卵丘细胞扩散评分 | 第98-99页 |
·Gpr3与MPF亚基在卵母细胞体外成熟过程中的表达规律分析 | 第99-101页 |
3 讨论 | 第101-103页 |
4 小结 | 第103-104页 |
参考文献 | 第104-108页 |
第五章 Gpr3在猪卵巢组织中的时空表达规律研究 | 第108-128页 |
摘要 | 第108-109页 |
1 材料与方法 | 第109-114页 |
·材料 | 第109-110页 |
·方法 | 第110-114页 |
2 结果与分析 | 第114-124页 |
·猪卵巢卵泡发育的组织形态学分析 | 第114-116页 |
·猪Gpr3蛋白在不同发育时期卵巢中的表达定位 | 第116-118页 |
·猪Gpr3蛋白在不同发育时期卵泡细胞中的表达变化 | 第118-119页 |
·猪Gpr3 mRNA和蛋白在不同发育时期卵巢中的表达规律分析 | 第119-121页 |
·猪Gpr3 mRNA和蛋白在不同直径卵巢卵泡中的表达规律分析 | 第121-122页 |
·猪Gpr3 mRNA和蛋白在不同品种猪卵巢中的表达规律分析 | 第122-124页 |
3 讨论 | 第124-125页 |
4 小结 | 第125-126页 |
参考文献 | 第126-128页 |
第六章 S1P对猪Gpr3受体组成性活性的影响 | 第128-148页 |
摘要 | 第128-129页 |
1 材料与方法 | 第129-136页 |
·材料 | 第129-130页 |
·方法 | 第130-136页 |
2 结果与分析 | 第136-144页 |
·猪Gpr3重组质粒的鉴定 | 第136-137页 |
·质粒转染HEK293细胞效率的检测 | 第137页 |
·质粒转染对猪Gpr3表达的影响 | 第137-138页 |
·猪Gpr3亚细胞定位 | 第138-139页 |
·猪Gpr3组成性活性的鉴定 | 第139-140页 |
·S1P对猪Gpr3组成性活性的影响 | 第140-142页 |
·鞘氨醇和鞘磷脂对猪Gpr3组成性活性的影响 | 第142页 |
·S1P对绿色荧光蛋白标记的猪Gpr3受体内化作用的影响 | 第142-144页 |
3 讨论 | 第144-145页 |
4 小结 | 第145页 |
参考文献 | 第145-148页 |
第七章 阻抑Gpr3信号通路对猪卵泡颗粒细胞生长与分化的影响 | 第148-166页 |
摘要 | 第148-149页 |
1 材料与方法 | 第149-154页 |
·材料 | 第149-150页 |
·方法 | 第150-154页 |
2 结果与分析 | 第154-161页 |
·引物扩增效果检测 | 第154-155页 |
·siRNA转染猪颗粒细胞的效率检测 | 第155页 |
·RNAi的方法抑制Gpr3的表达 | 第155-157页 |
·阻抑Gpr3信号通路对颗粒细胞生长的影响 | 第157页 |
·阻抑Gpr3信号通路对颗粒细胞周期的影响 | 第157-158页 |
·阻抑Gpr3信号通路对细胞周期相关因子的影响 | 第158页 |
·阻抑Gpr3信号通路对颗粒细胞凋亡的影响 | 第158-159页 |
·阻抑Gpr3信号通路对细胞凋亡相关基因表达的影响 | 第159页 |
·阻抑Gpr3信号通路对颗粒细胞分泌雌二醇和孕酮的影响 | 第159-160页 |
·阻抑Gpr3信号通路对Gpr3亚家族其它成员mRNA表达的影响 | 第160-161页 |
3 讨论 | 第161-163页 |
4 小结 | 第163页 |
参考文献 | 第163-166页 |
第八章 超表达Gpr3对猪卵泡颗粒细胞生长与分化的影响 | 第166-180页 |
摘要 | 第166-167页 |
1 材料与方法 | 第167-169页 |
·材料 | 第167页 |
·方法 | 第167-169页 |
2 结果与分析 | 第169-176页 |
·GFP重组载体的鉴定 | 第169页 |
·质粒转染颗粒细胞效率的检测 | 第169-170页 |
·质粒转染对Gpr3表达的影响 | 第170-171页 |
·超表达Gpr3对颗粒细胞生长的影响 | 第171-172页 |
·超表达Gpr3对颗粒细胞周期的影响 | 第172-173页 |
·超表达Gpr3对细胞周期相关因子的影响 | 第173页 |
·超表达Gpr3对颗粒细胞凋亡的影响 | 第173-174页 |
·超表达Gpr3对细胞凋亡相关基因表达的影响 | 第174-175页 |
·超表达Gpr3对颗粒细胞分泌雌二醇和孕酮的影响 | 第175页 |
·超表达Gpr3对类固醇合成相关酶表达的影响 | 第175页 |
·超表达Gpr3对Gpr3亚家族其它成员mRNA表达的影响 | 第175-176页 |
3 讨论 | 第176-177页 |
4 小结 | 第177页 |
参考文献 | 第177-180页 |
全文结论 | 第180-182页 |
创新点 | 第182-184页 |
附录一 主要溶液的配制 | 第184-188页 |
附录二 哺乳动物Gpr3亚家族编码区比对结果 | 第188-200页 |
致谢 | 第200-202页 |
攻读博士期间发表及待发表的论文 | 第202-203页 |