| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-9页 |
| 第二章 文献综述 | 第9-22页 |
| ·烟草花叶病毒 | 第9-10页 |
| ·烟草花叶病毒的寄主范围 | 第9页 |
| ·烟草花叶病毒的结构及基因组组成 | 第9-10页 |
| ·烟草花叶病毒的传播方式及危害 | 第10页 |
| ·植物抗病基因 | 第10-18页 |
| ·植物抗病基因种类 | 第11页 |
| ·植物抗病基因的结构 | 第11-12页 |
| ·植物抗病基因作用方式假说 | 第12页 |
| ·植物抗病基因作用途径 | 第12-13页 |
| ·植物抗病反应的信号元件 | 第13-15页 |
| ·RNA干扰技术 | 第15-18页 |
| ·RNA干扰 | 第15-17页 |
| ·RNAi在植物抗病毒防卫反应中的作用 | 第17页 |
| ·RNAi在鉴定基因功能中的应用 | 第17-18页 |
| ·植物抗烟草花叶病毒的研究进展 | 第18-22页 |
| ·植物抗烟草花叶病毒的基因 | 第19-20页 |
| ·抗烟草花叶病毒的转基因植物育种 | 第20-22页 |
| 第三章 材料和方法 | 第22-36页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·烟草花叶病毒毒株 | 第22页 |
| ·菌株和克隆载体 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·酶、试剂盒及测序 | 第23页 |
| ·目的基因片段的克隆 | 第23-27页 |
| ·试验设计 | 第23-24页 |
| ·试验方法 | 第24-27页 |
| ·林烟草总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·反转录克隆8个信号元件的目的基因片段 | 第25页 |
| ·目的片段的回收 | 第25-26页 |
| ·目的片段与T载体相连 | 第26页 |
| ·将连接产物转化大肠杆菌DH5 α | 第26页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第26-27页 |
| ·正确目的基因片段的保存 | 第27页 |
| ·RNAi植物表达载体的构建 | 第27-31页 |
| ·试验设计 | 第27-29页 |
| ·试验方法 | 第29-31页 |
| ·克隆目的基因的正义和反义片段 | 第29页 |
| ·用XhoⅠ和SpeⅠ酶切正义目的片段和中间载体pUCCRNAi | 第29页 |
| ·电泳分离酶切产物并回收 | 第29页 |
| ·正义目的片段与中间载体相连接 | 第29-30页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第30页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第30页 |
| ·质粒的保存 | 第30-31页 |
| ·农杆菌介导的林烟草遗传转化 | 第31-34页 |
| ·试验设计 | 第31-32页 |
| ·试验方法 | 第32-34页 |
| ·所构建的8个RNAi载体转化农杆菌 | 第32页 |
| ·无菌苗的培养 | 第32页 |
| ·农杆菌侵染用菌液的准备 | 第32页 |
| ·侵染 | 第32-33页 |
| ·共培养、分化继代 | 第33页 |
| ·生根、炼苗 | 第33-34页 |
| 附 | 第33-34页 |
| 一、大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 二、农杆菌感受态的制备 | 第33-34页 |
| 三、菌种保存 | 第34页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第34-35页 |
| ·试验设计 | 第34页 |
| ·试验方法 | 第34-35页 |
| ·再生植株基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| ·再生植株检测 | 第35页 |
| ·再生植株的体外病毒接种试验 | 第35-36页 |
| ·试验设计 | 第35页 |
| ·试验方法 | 第35-36页 |
| 第四章 结果和分析 | 第36-45页 |
| ·基因克隆 | 第36-37页 |
| ·RNA干扰植物表达载体的构建 | 第37-41页 |
| ·目的基因片段正向连入pUCCRNAi中间表达载体 | 第37-38页 |
| ·目的基因反向连入pUCCRNAi中间表达载体 | 第38-39页 |
| ·将目的基因的反向互补序列连入pCAM2300-35S-Ocs植物表达载体 | 第39-41页 |
| ·农杆菌介导的林烟草遗传转化 | 第41-42页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第42-43页 |
| ·TMV-T1摩擦接种转基因植株 | 第43-45页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第45-47页 |
| ·结论 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·今后的工作建议 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 在学期间旳研究成果 | 第55-56页 |
| 项目资助 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
