| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-17页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶（Arginine deiminase，ADI） | 第7-11页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的简介及催化代谢途径概况 | 第7页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的来源及性质研究 | 第7-8页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的晶体结构及催化机制 | 第8-10页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的实际应用及相关研究进展 | 第10-11页 |
| ·蛋白质的分子改造技术 | 第11-15页 |
| ·定向进化技术 | 第11-13页 |
| ·理性设计定点突变技术 | 第13页 |
| ·半理性设计饱和突变技术 | 第13-14页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的分子改造概况 | 第14-15页 |
| ·本课题的来源、研究背景及研究意义 | 第15-16页 |
| ·本课题的来源 | 第15页 |
| ·本课题的研究背景及研究意义 | 第15-16页 |
| ·本课题的研究思路及研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第17-23页 |
| ·实验材料 | 第17-18页 |
| ·实验菌种与载体 | 第17页 |
| ·实验主要试剂及设备 | 第17页 |
| ·实验所用引物 | 第17-18页 |
| ·主要培养基和溶液 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-23页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的随机突变库构建及高通量筛选 | 第18-21页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的定点突变 | 第21-22页 |
| ·优势位点 K272R 与 S245D 的叠加分析 | 第22页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的定点饱和突变筛选 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-44页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的定向进化 | 第23-28页 |
| ·随机突变库的构建及高通量筛选 | 第23-24页 |
| ·突变酶（突变株 M173）的纯化 | 第24页 |
| ·ADI 突变酶（突变株 M173）的比活测定 | 第24-25页 |
| ·ADI 突变酶（突变株 M173）最适 pH 的测定 | 第25页 |
| ·ADI 突变酶（突变株 M173）动力学参数的测定 | 第25-27页 |
| ·ADI 突变酶（突变株 M173）的蛋白结构模拟与分析 | 第27-28页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的理性设计及定点突变验证 | 第28-38页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶待突变位点的理性设计 | 第28-36页 |
| ·定点突变制备突变株 M04 (A128T/H404R/I410L/S245D) | 第36页 |
| ·突变酶（突变株 M04）的纯化 | 第36-37页 |
| ·ADI 突变酶（突变株 M04）比酶活的测定 | 第37页 |
| ·ADI 突变酶（突变株 M04）最适 pH 的测定 | 第37-38页 |
| ·ADI 突变酶（突变株 M04）动力学参数的测定 | 第38页 |
| ·优势位点 K272R 与 S245D 的叠加分析 | 第38-40页 |
| ·定点突变引入 K272R 与 S245D 至突变株 M13 | 第38-39页 |
| ·ADI 突变酶（突变株 M13-2）的纯化 | 第39页 |
| ·ADI 突变酶（突变株 M13-2）比活的测定 | 第39-40页 |
| ·ADI 突变酶（突变株 M13-2）最适 pH 的测定 | 第40页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的半理性定点饱和突变筛选 | 第40-44页 |
| ·饱和突变位点的确定 | 第40-41页 |
| ·定点饱和突变库的构建 | 第41页 |
| ·定点饱和突变库的筛选结果 | 第41-44页 |
| 主要结论与展望 | 第44-46页 |
| 主要结论 | 第44-45页 |
| 展望 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52页 |
