定向进化E.coli芳香族氨基酸转氨酶提高催化DL-高苯丙氨酸与D-正亮氨酸的活力
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩写词与符号 | 第9-12页 |
| 第一部分 研究背景 | 第12-24页 |
| 1 转氨酶简介 | 第12-15页 |
| ·芳香族氨基酸转氨酶的序列及结构特点 | 第13-15页 |
| 2 手性药物与非天然氨基酸 | 第15-17页 |
| ·手性药物 | 第15页 |
| ·非天然氨基酸 | 第15-16页 |
| ·非天然氨基酸的合成 | 第16-17页 |
| 3 酶的定向进化 | 第17-21页 |
| ·易错PCR | 第19页 |
| ·DNA改组和外显子改组 | 第19-20页 |
| ·随机引物体外重组 | 第20页 |
| ·交错延伸 | 第20-21页 |
| 4 文库的筛选 | 第21页 |
| 5 偶联反应的酶学性质测定 | 第21-23页 |
| 6 本文研究的内容、目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二部分 实验研究 | 第24-77页 |
| 1 实验材料,仪器与试剂 | 第24-30页 |
| ·实验菌株与载体 | 第24页 |
| ·主要仪器与设备 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·所用培养基及配制 | 第25-26页 |
| ·主要溶液及其配制 | 第26-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-46页 |
| ·易错PCR扩增与突变文库的构建 | 第30-37页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第37-42页 |
| ·定量比较突变型与野生型粗酶液的催化活力 | 第42-44页 |
| ·在不同的pH和温度下的酶活力检测 | 第44-45页 |
| ·突变型转氨酶的序列和突变位点分析 | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-77页 |
| ·易错PCR条件的确定 | 第46-47页 |
| ·基因扩增和突变体文库的构建 | 第47-50页 |
| ·阳性突变株的筛选和鉴定 | 第50-60页 |
| ·定量比较突变型与野生型粗酶液的催化活力 | 第60-66页 |
| ·芳香族氨基酸转氨酶在不同pH和温度下的活力检测 | 第66-69页 |
| ·突变转氨酶的序列分析和突变位点分析 | 第69-77页 |
| 第三部分 讨论与展望 | 第77-81页 |
| 1 讨论 | 第77-79页 |
| 2 展望 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
