| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-20页 |
| ·研究背景 | 第10页 |
| ·萘酰亚胺衍生物最新研究进展 | 第10-13页 |
| ·单体萘酰亚胺化合物 | 第10-11页 |
| ·具有DNA光损伤活性的抗肿瘤单体萘酰亚胺类衍生物 | 第11页 |
| ·降低氨奈菲特毒性性质的单体萘酰亚胺衍生物 | 第11页 |
| ·双体萘酰亚胺抗肿瘤化合物 | 第11-12页 |
| ·最新合成的靶向DNA的抗肿瘤双萘酰亚胺化合物 | 第12页 |
| ·其他杂环结合的萘酰亚胺类的抗肿瘤化合物 | 第12页 |
| ·萘酰亚胺类衍生物的发展前景 | 第12-13页 |
| ·DNA损伤与细胞周期阻滞和凋亡关系的研究进展 | 第13-18页 |
| ·DNA损伤与TOP Ⅱ抑制剂的关系 | 第13页 |
| ·ATM/ATR：DNA损伤的感受器 | 第13页 |
| ·DNA损伤与p53的关系 | 第13-14页 |
| ·E2F1的功能关系 | 第14页 |
| ·E2F1在DNA损伤中受到类似p53一样的调控 | 第14-15页 |
| ·E2F1和p53在DNA损伤介导的凋亡中相似的作用 | 第15-16页 |
| ·E2F1的凋亡通路 | 第16-17页 |
| ·DNA损伤研究对萘酰亚胺化合物抗肿瘤发展的意义 | 第17-18页 |
| ·研究目标、创新点和意义 | 第18-20页 |
| ·研究目标 | 第18-19页 |
| ·创新点 | 第19页 |
| ·研究意义 | 第19-20页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第20-29页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·细胞株 | 第20页 |
| ·实验药物 | 第20页 |
| ·实验试剂 | 第20-22页 |
| ·仪器与设备 | 第22-23页 |
| ·常用试剂配制 | 第23-27页 |
| ·常用实验方法 | 第27-29页 |
| ·高压灭菌 | 第27页 |
| ·细胞的换液与传代 | 第27页 |
| ·细胞的复苏 | 第27-28页 |
| ·细胞的冻存 | 第28-29页 |
| 第3章 7d化合物的抗肿瘤活性筛选 | 第29-36页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·实验材料与方法 | 第29-32页 |
| ·细胞株 | 第29页 |
| ·主要实验试剂 | 第29-30页 |
| ·主要实验仪器 | 第30页 |
| ·MTT法检测细胞存活率 | 第30页 |
| ·克隆形成实验 | 第30-31页 |
| ·数据处理 | 第31-32页 |
| ·实验结果 | 第32-34页 |
| ·7d和Amonafide化合物对7株不同细胞株存活率的影响 | 第32-33页 |
| ·7d化合物对于不同癌细胞株的生长抑制作用 | 第33-34页 |
| ·7d化合物时间和浓度依赖性的抑制K562的存活率 | 第34页 |
| ·结论 | 第34-36页 |
| 第4章 7d化合物对K562细胞周期分布的影响 | 第36-40页 |
| ·概述 | 第36页 |
| ·实验材料与方法 | 第36-37页 |
| ·细胞株 | 第36页 |
| ·主要实验试剂 | 第36页 |
| ·主要实验仪器 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-37页 |
| ·统计学方法 | 第37页 |
| ·实验结果 | 第37-39页 |
| ·7d化合物浓度和时间依赖性的阻滞K562细胞于G2/M期 | 第37-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第5章 7d化合物对K562细胞凋亡的影响 | 第40-46页 |
| ·概述 | 第40页 |
| ·实验材料和方法 | 第40-42页 |
| ·细胞株 | 第40页 |
| ·主要实验试剂 | 第40页 |
| ·主要实验仪器 | 第40页 |
| ·Hoechst33258染料染色观察细胞核形态 | 第40-41页 |
| ·DNA ladder分析 | 第41页 |
| ·Annexin V-FITC/PI双染法检测7d对K562细胞的凋亡 | 第41-42页 |
| ·实验结果 | 第42-45页 |
| ·7d化合物诱导K562细胞凋亡形态的变化 | 第42页 |
| ·7d化合物增加了K562细胞凋亡数量 | 第42-44页 |
| ·7d化合物引起K562 DNA片段化 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第6章 7d化合物诱导K562细胞周期阻滞和凋亡的分子机理 | 第46-53页 |
| ·概述 | 第46页 |
| ·实验材料和方法 | 第46-49页 |
| ·细胞株 | 第46页 |
| ·主要实验试剂 | 第46-47页 |
| ·主要实验仪器 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-49页 |
| ·提取K562细胞中的总蛋白、核蛋白以及蛋白定量 | 第47-48页 |
| ·蛋白免疫印迹电泳 | 第48-49页 |
| ·实验结果 | 第49-50页 |
| ·7d化合物对p73,p21以及G2/M周期相关蛋白的影响 | 第49-50页 |
| ·7d化合物对于线粒体凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cytC、caspase-3表达以及NF-κB的核转位的影响 | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| 第7章 7d化合物诱导了E2F1凋亡通路的激活 | 第53-62页 |
| ·概述 | 第53页 |
| ·实验材料和方法 | 第53-56页 |
| ·细胞株 | 第53页 |
| ·主要实验材料 | 第53-54页 |
| ·主要实验仪器 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·Real-time PCR实验 | 第54-55页 |
| ·蛋白免疫共沉淀实验 | 第55-56页 |
| ·siRNA转染敲除实验 | 第56页 |
| ·统计学方法 | 第56页 |
| ·实验结果 | 第56-59页 |
| ·d化合物对E2F1凋亡通路蛋白分子p73， Apaf-1及负性调控蛋白HDM2的影响 | 第56-57页 |
| ·7d化合物对E2F1凋亡通路分子以及其负性调控蛋白HDM2 mRNA的影响 | 第57-58页 |
| ·E2F1的敲除逆转了7d化合物对K562细胞的G2-M期阻滞和凋亡 | 第58-59页 |
| ·E2F1的敲除降低了7d化合物对p73、Apaf-1和p21蛋白分子的激活 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| 第8章 ATM/ATR DNA损伤信号通路介导了E2F1的激活 | 第62-69页 |
| ·概述 | 第62页 |
| ·实验材料和方法 | 第62-64页 |
| ·细胞株 | 第62页 |
| ·主要实验材料 | 第62页 |
| ·主要实验仪器 | 第62-63页 |
| ·彗星电泳 | 第63页 |
| ·AnnexinV-FITC/PI流式双染法检测凋亡 | 第63页 |
| ·PI流式单染法检测细胞周期分布 | 第63页 |
| ·Western blotting分析 | 第63-64页 |
| ·统计学方法 | 第64页 |
| ·实验结果 | 第64-67页 |
| ·7d化合物诱导K562细胞DNA损伤 | 第64-65页 |
| ·ATM/ATR通路抑制剂caffeine抑制了7d化合物诱导的DNA损伤、G2-M期阻滞和凋亡 | 第65-66页 |
| ·ATM/ATR通路抑制剂caffeine抑制了7d诱导的γ-H2AX、E2F1和E2F1-p~(ser364)的表达 | 第66页 |
| ·7d化合物降低了E2F1和HDM2蛋白之间的相互作用 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 第9章 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 论文及专利发表情况 | 第80页 |
